חלבון בשתן, בדיקות מעבדה. שיטות לקביעת חלבון בשתן

למרפאה יש חשיבות לקביעה איכותית וגם כמותית של חלבון בשתן.

בדיקות איכותיות לקביעת חלבון בשתן
הוצעו יותר מ-100 תגובות לקביעה איכותית של חלבון בשתן. רובם מבוססים על משקעים של חלבון על ידי פיזי (חימום) או כימיקלים. נוכחות חלבון מוכחת על ידי הופעת עכירות.

דגימות יבשות קולורימטריות הן גם מעניינות.

רק הדוגמאות החשובות ביותר לתרגול יתוארו להלן.

דגימה עם חומצה סולפוסיצילית. למספר מיליליטר של שתן, הוסף 2-4 טיפות של תמיסה 20% של חומצה סולפוסיצילית. עם תגובה חיובית, עכירות מופיעה. התוצאה מסומנת במונחים: אטימות, תגובה חיובית חלשה, חיובית או חיובית חזקה. בדיקת חומצה סולפוסיצילית היא אחת הבדיקות הרגישות ביותר לקביעת חלבון בשתן. זה חושף אפילו את הקטן ביותר הגדלות פתולוגיותחלבון בשתן. הודות לטכניקה פשוטה, מבחן זה מצא יישום רחב.

בדיקת אספטול. אספטול הוא תחליף לחומצה סולפוסיצילית. ניתן להכין אותו מחומרים הזמינים בכל מעבדה (פנול וחומצה גופרתית). תמיסת 20% של אספטול משמשת כמגיב. הבדיקה מתבצעת באופן הבא: במבחנה המכילה 2-3 מ"ל שתן מוסיפים לתחתית 0.5-1 מ"ל תמיסת אספטול. אם נוצרת טבעת לבנה של חלבון קרוש בממשק בין שני הנוזלים, הבדיקה חיובית.

מבחן גלר. מתחת לכמה מיליליטר של שתן, הוסף 1-2 מ"ל של חומצה חנקתית 30% (משקל ספוג 1.20). אם מופיעה טבעת לבנה בממשק של שני הנוזלים, הדגימה חיובית. התגובה הופכת חיובית אם החלבון הוא יותר מ-3.3 מ"ג%. לפעמים מתקבלת טבעת לבנה בנוכחות כמויות גדולות של urates. בניגוד לטבעת החלבון, טבעת האוראט אינה מופיעה בגבול בין שני הנוזלים, אלא מעט גבוה יותר. לריונובה מציעה להשתמש בתמיסת חומצה חנקתית 1% בתמיסה רוויה במקום 30% חומצה חנקתית כמגיב מלח שולחן; זה נותן חיסכון גדול של חומצה חנקתית.

בדוק עם אשלגן פרוגי וחומצה אצטית. תגובה זו מאפשרת להבחין בין חלבוני סרום לבין נוקלאואלבומינים.

כמויות שוות של שתן מוזגות לשתי מבחנות. לאחת מהן מוסיפים כמה טיפות של תמיסת חומצה אצטית 30%. אם יש אובך בהשוואה לצינור הבקרה, השתן מכיל נוקלאואלבומין. אם לא מופיעה עכירות, מערבבים את התוכן של שני הצינורות ושוב מחלקים לשני חלקים. לאחת משתי המבחנות, מוסיפים כמה טיפות (עודף יכול להפוך דגימה חיובית לשלילית) של תמיסה של 10% של מלח דם צהוב (אשלגן פריציאניד). בנוכחות חלבוני מי גבינה מתקבלת עכירות.

עם שתן מרוכז המכיל כמויות גדולות של חומצת שתן ואוראטים, יש לבצע בדיקה עם אשלגן פריציאניד וחומצה אצטית לאחר דילול מקדים (פי 2-3) של שתן במים. אחרת, עלולה להיווצר עכירות הנגרמת על ידי חומצת שתן שקועה.

זה חשוב במיוחד כאשר בודקים שתן של תינוקות המכילים הרבה חומצת שתן ו-urates.

מבין שאר הבדיקות האיכותיות לחלבון בשתן, המבוססות על משקעים של חלבונים, נעשה שימוש: בדיקת הרתיחה, הבדיקות של Esbach, Purdy, Roberts, Almen, Balloni, Buro, Claudius, Corso, Dome, Goodmann. -סוזן, ג'ולט, אקסטון, קמלט, קובולדזה, לילינדל-פטרסן, פולאצ'י, פונס, שפיגלר, טנרה, ת'ילה, בראון, צושיה וכו'.

בייצור דגימות חלבון שתן איכותיות המבוססות על משקעי חלבון, יש להקפיד על הכללים הכלליים הבאים, שהפרתם מובילה לטעויות משמעותיות בניתוח.

1. השתן שייבדק חייב להיות חומצי. בתגובה בסיסית, השתן מחומצן מעט עם חומצה אצטית. הפקת דגימת שתן אלקליין כאשר חומצה משמשת כמגיב עלולה לגרום לנטרול החומצה ולתוצאה שלילית אם היא חיובית. זה נכון במיוחד עבור דגימת החומצה הסולפוסליצילית, שכן החומצה מתווספת בכמויות קטנות מאוד וניתן לנטרל בקלות.

2. השתן שייבדק חייב להיות צלול.

3. דגימות לקביעת חלבון בשתן צריכות להיעשות תמיד בשתי מבחנות, שאחת מהן משמשת כביקורת. ללא צינור בקרה, ייתכן שלא תבחין בעכירות קלה בתגובות.

4. כמות החומצה הנוספת בדגימות לא צריכה להיות גדולה מדי. כמות גדולה של חומצה עלולה להוביל ליצירת חומצה מסיסים ולהפיכת דגימה חיובית לשלילית.

ראוי לתשומת לב רבה, בשל הטכניקה הפשוטה שלהם, דגימות יבשות קולורימטריות. בדיקות אלו משתמשות בהשפעה שיש לחלבון על צבעו של אינדיקטור בתמיסת חיץ (מה שנקרא שגיאת אינדיקטור חלבון). רצועת נייר סינון ספוג במאגר ציטראט חומצי וברום פנול כחול כאינדיקטור טבול על זמן קצרלתוך שתן. הבדיקה חיובית אם מתקבל צבע כחול-ירוק. על ידי השוואת עוצמת הצבע עם תקני נייר צבעוני, ניתן להסיק גם מסקנות טנטטיביות וכמותיות. ניירות אינדיקטור נמכרים בחבילות של תקני צבע מתאימים, בדומה לניירות חיווי אוניברסליים.

שיטות לקביעה כמותית של חלבון בשתן
שיטות רבות הוצעו לקביעה כמותית של חלבון בשתן. שיטות כמותיות מדויקות לקביעת חלבונים בחומר ביולוגי לא מצאו יישום נרחב בקביעת חלבון בשתן, בשל טכניקות מורכבות וגוזלות זמן. שיטות נפחיות, במיוחד שיטת Esbach, נמצאות בשימוש נרחב. הם מאוד פשוטים, אבל, למרבה הצער, הם לא מאוד מדויקים. גם השיטות של קבוצת ברנדברג-סטולניקוב נוחות למרפאה, נותנות תוצאות מדויקות יותר משיטות נפח, בטכניקה פשוטה יחסית. בנוכחות פוטומטר או נפלומטר, גם שיטות נפלומטריות נוחות.

שיטת אסבך. הוא הוצע על ידי הרופא הפריזאי אסבך בשנת 1874. שתן ומגיב מוזגים למבחנה מיוחדת (אלבומינומטר של אסבך). את המבחנה מפקקים בפקק גומי, מערבבים היטב (בלי להכות!) ומשאירים אותו במצב זקוף עד למחרת. הם מדווחים על החלוקה, שאליה מגיע עמודת משקעי החלבון. המספר שנמצא מראה את תכולת החלבון. חשוב מאוד בשיטת אסבך שהשתן יהיה חומצי. שתן בסיסי יכול לנטרל את המרכיבים החומציים של המגיב ולמנוע משקעים של חלבונים.

יתרונות השיטה: היא פשוטה ונוחה בפועל.

חסרונות: השיטה אינה מדויקת, התוצאה מתקבלת לאחר 24 - 48 שעות.

שיטת ברנדברג-סטולניקוב. הוא מבוסס על מבחן גלר איכותי. ניתן להשתמש במבחן גלר לכימות כפי שהוא נותן תוצאה חיוביתכאשר תכולת החלבון היא מעל 3.3 מ"ג%. זהו ריכוז החלבון המגביל שמתחתיו הדגימה הופכת לשלילית.

שינוי ארליך ואלטהאוזן. המדענים הסובייטים S. L. Erlikh ו- A. Ya. Althausen שינו את שיטת ברנדברג-סטולניקוב, והצביעו על האפשרות לפשט את המחקר ולחסוך זמן בייצורו.

הפשט הראשון קשור לזמן הופעת הטבעת. הזמן המדויק של הופעתו נקבע, מבלי להקפיד בהכרח על הדקות ה-2 וה-3.

הפשט השני מאפשר לקבוע איזה דילול צריך לעשות. המחברים הוכיחו שניתן לקבוע בקירוב את הדילול הנדרש לפי סוג הטבעת שהתקבלה. הם מבחינים פיליפורמיים, רחבים
וטבעת קומפקטית.

מהשיטות הנפלומטריות ראוי לציין שיטת קינגסברי וקלארק. 2.5 מ"ל של שתן מסונן מוזגים לתוך גליל מדורג קטן, ממולאים בתמיסה מימית של 3% של חומצה סולפוסיצילית עד 10 מ"ל. מערבבים היטב ולאחר 5 דקות פוטומטר בקובטה של ​​1 ס"מ, עם מסנן צהוב, תוך שימוש במים כנוזל פיצוי. עם פוטומטר Pulfrich, ההכחדה שנמצאה, כפול 2.5, נותנת את כמות החלבון ב-%o. במקרה שבו מדד ההכחדה גבוה מ-1.0, השתן מדולל מראש 2 פעמים, 4 פעמים או אפילו יותר.

על מנת לקבל מושג ברור לגבי כמות החלבונים המופרשת בשתן, יש צורך לקבוע לא רק את ריכוזם בחלק נפרד של שתן, אלא גם את הכמות היומית הכוללת שלהם. לשם כך יש לאסוף את השתן של המטופל למשך 24 שעות, למדוד את נפחו במיליליטר ולקבוע את ריכוז החלבון במנת שתן יומית ב-g%. כמות החלבונים המופרשת בשתן ב-24 שעות נקבעת בהתאם לכמות השתן היומית בגרמים.

משמעות קלינית של חלבון בשתן

שתן אנושי מכיל בדרך כלל כמויות מינימליות של חלבון שלא ניתן לקבוע על ידי בדיקות חלבון איכותיות שגרתיות בשתן. הפרשת כמויות גדולות של חלבון, שבהן בדיקות איכותניות רגילות לחלבון בשתן הופכות לחיוביות, היא תופעה חריגה הנקראת פרוטאינוריה. פרוטאינוריה היא פיזיולוגית רק ביילוד, ב-4-10 הימים הראשונים לאחר הלידה. השם הנפוץ אלבומינוריה אינו נכון, מכיוון שלא רק אלבומינים, אלא גם סוגים אחרים של חלבונים (גלובולינים וכו') מופרשים בשתן.

פרוטאינוריה, כסימפטום אבחנתי, התגלתה בשנת 1770 על ידי Cotugno.

הפרוטאוריה הכלייתית התפקודית החשובה ביותר בילדים היא כדלקמן:

1. פרוטאינוריה פיזיולוגית של היילוד. זה מתרחש ברוב הילודים ואין לו משמעות שלילית. זה מוסבר על ידי מסנן כליות חלש, נזק בלידה או אובדן נוזלים בימים הראשונים לחיים. פרוטאינוריה פיזיולוגית נעלמת ביום ה-4-10 לאחר הלידה (ב פגיםיותר מאוחר). כמות החלבון קטנה. זה נוקלאואלבומין.

אלבומינוריה של יילודים ארוכת טווח עשויה להיות סימפטום של אטום מולדת.

2. שבץ אלבומינוריה. הם נגרמים על ידי חריגה מהסף של עצבנות נורמלית של מסנן הכליות על ידי גירויים מכניים, תרמיים, כימיים, נפשיים ואחרים משמעותיים - איבוד נוזלים אצל תינוקות (פרוטאינוריה מיובשת), רחצה קרה, מזון עשיר בחלבונים (פרוטאינוריה מזון) , מישוש של הכליה (אלבומינוריה מישוש), עבודת יתר פיזית, פחד וכו'.

שבץ אלבומינוריה מופיע ביתר קלות אצל ילדים ב גיל מוקדםמאשר אצל ילדים גדולים יותר ומבוגרים, שכן הכליות של תינוק וילד קטן מגורות בקלות רבה יותר. התייבשות אלבומינוריה (תת תזונה, הידרולביליות, רעילות, שלשולים, הקאות) נצפתה לעתים קרובות במיוחד אצל תינוקות.

שבץ אלבומינוריה הוא שפיר. הם נעלמים מיד לאחר חיסול הגורמים הגורמים להם. בפיקדון לפעמים יש לויקוציטים בודדים, גלילים ואריתרוציטים. החלבון הוא לרוב נוקלאואלבומין.

3. פרוטאינוריה אורתוסטטית. מצב זה אופייני לילדים בגילאי הגן ובית הספר. זה מתרחש על בסיס הפרעות vasomotor של אספקת הדם לכליה. אופייני לאלבומינוריה אורתוסטטית (ומכאן שמה) היא שהיא מופיעה רק כשהילד עומד, כאשר עמוד השדרה במצב לורדוטי. במצב שכיבה הוא נעלם. נוקלאואלבומין משתחרר. במקרים מפוקפקים, אתה יכול לפנות לניסיון אורתוסטטי, שהוא כדלקמן: בערב, שעה לפני השינה, הילד מרוקן את השלפוחית; בבוקר, כשהוא קם מהמיטה, הוא משתין שוב. שתן זה אינו מכיל חלבון. לאחר מכן מניחים את הילד על ברכיו למשך 15-30 דקות עם מקל מאחורי הגב, בין המרפקים הכפופים של שתי הידיים. נוצרת עמדה של לורדוזיס, המובילה לשחרור חלבון, ללא שינויים במשקעים.

עם אלבומינוריה אורתוסטטית, ניתן להפריש 8-10 גרם חלבון ביום.

החשוב ביותר משמעות קליניתבין כל הפרוטאינוריה יש פרוטאינוריה כלייתית אורגנית. הם נגרמים על ידי מחלות אורגניות של הכליות (דלקת כליות, נפרוזה, נפרוסקלרוזיס). פרוטאינוריה היא אחד התסמינים החשובים והידועים ביותר של מחלת כליות אורגנית.

1. בגלומרולונפריטיס חריפה וכרונית מופיעה פרוטאינוריה באופן קבוע. כמות החלבון בינונית, ואין הקבלה בין מידת הפרוטאוריה לחומרת המחלה. לעומת זאת, דלקת כליות כרונית וחמורה יותר מתרחשת לעתים קרובות עם פחות חלבון מאשר אלה חריפות. לאחר דלקת נפריטיס חריפה, לעיתים לאורך זמן (שנים), נוצרות כמויות קטנות של חלבון בשתן, שאין להן משמעות פתולוגית ("אלבומינוריה שיורית"). אל לנו לשכוח כי "דלקת כליות ללא פרוטאינוריה" יכולה להתרחש גם. לפעמים החלבון נמצא בחלק אחד של השתן, אך לא בחלק השני. היחס בין אלבומינים לגלובולינים בדלקת נפריטיס חריפה נמוך, ובדלקת נפריטיס כרונית הוא גבוה יותר.

2. עם נפרוסתקלרוזיס, כמות החלבון בשתן קטנה מאוד, לעיתים קרובות יש צורות של המחלה ללא חלבון בשתן.

3. מכל מחלות הכליה, נפרוזה מתרחשת עם פרוטאינוריה הבולטת ביותר.

4. במצבים זיהומיים ורעילים מתרחשים מה שנקרא פרוטאינוריה חום ורעיל. אלו הם נפרוזים חריפים, שבהם כמות החלבון קטנה. קבוצה זו כוללת גם פרוטאינוריה במצבי עווית (עוויתות), פעילות יתר של בלוטת התריס, צהבת, אינטוסוסספציה, אנטרוקוליטיס, כוויות, אנמיה חמורה ועוד. אלבומינוריה אלו שפירות וחולפות במהירות (אלבומינוריה חולפת).

5. עם סטגנציה של דם בכליות, מתרחשת מה שנקרא אלבומינוריה גדושה, האופיינית לחולי לב בשלב הדיקומפנסציה. הוא נמצא גם במיימת ובגידולי הבטן.

עם אלבומינוריה קדחתנית, רעילה וגודשת, החדירות המוגברת של מסנן הכליות בולטת במיוחד. לדברי כמה מחברים, רבים מהפרוטאינוריה הללו מתרחשים ללא נזק אורגני לפרנכימה של הכליות.

אלבומינוריה חוץ-כליתיתנגרמים בדרך כלל על ידי זיהומים חלבוניים (הפרשות, תאים רקובים), המופרשים על ידי דרכי שתן ואיברי מין חולים. אלבומינוריה חוץ-כליתית שכיחה יותר בגלל ציסטופיליטיס (פיוריה), לעתים רחוקות יותר בגלל דלקת פות, אבנית וגידולים בדרכי השתן.

עם אלבומינוריה חוץ-כליתית, מספר רב של לויקוציטים וחיידקים נמצאים במשקעים. אלמנטים כלייתיים כמעט ולא נמצאים. כמות החלבון קטנה. שתן מסונן או צנטריפוגה בדרך כלל אינו נבדק חיובי לחלבון.

אצל המחלימים מפיאליטיס, אלבומינוריה נעלמת לאחר בקטריוריה ופיוריה.

יש להדגיש כתופעה אופיינית כי מחלות כליות אורגניות מופיעות לעיתים רחוקות ביותר בילדות המוקדמת, ולכן גם פרוטאינוריה אורגנית נדירה. מתוכם, יש בעיקר חום ורעיל. בניגוד לפרוטאינוריה אורגנית, אלבומינוריה שבץ שכיחה מאוד בילדים בגיל צעיר.

בילדים גדולים יותר, פרוטאינוריה אורגנית מתפקדת לעתים קרובות יותר. באופן כללי, עם הגיל, פרוטאינוריה תפקודית פחות שכיחה, ואורגנית לעתים קרובות יותר.

מחקרים אלקטרופורטיים של חלבונים בשתן

מספר מחברים משתמשים בשיטה האלקטרופורטית כדי לחקור חלבונים בשתן (אורפרוטאינים). ניתן לראות מהאלקטרופורגרמות שהתקבלו שיש להן הרכב איכותי כמו חלבוני פלזמה. זה מצביע על כך שהחלבונים בשתן נגזרים מחלבוני פלזמה.

תוכן עניינים [הצג]

אדם בריא מפריש 1.0-1.5 ליטר שתן ביום. התוכן של 8-10 מ"ג / ד"ל חלבון בו - תופעה פיזיולוגית. קצב החלבון היומי בשתן של 100-150 מ"ג אינו אמור לעורר חשד. גלובולין, מוקופרוטאינים ואלבומין הם המרכיבים את סך החלבון בשתן. יציאה גדולה של אלבומין מעידה על הפרה של תהליך הסינון בכליות ונקראת פרוטאינוריה או אלבומינוריה.

לכל חומר בשתן נקבעת נורמה "בריאה", ואם מדד החלבון משתנה, הדבר עשוי להצביע על פתולוגיה של הכליות.

בדיקת שתן כללית מרמזת על שימוש במנה הראשונה (בוקר), או שנלקחת דגימה יומית. האחרון עדיף להערכת רמת החלבון, שכן תכולת החלבון חווה תנודות יומיות בולטות. שתן במהלך היום נאסף במיכל אחד, הנפח הכולל נמדד. עבור מעבדה המנתחת שתן לחלבון, מספיקה דגימה סטנדרטית (50 עד 100 מ"ל) מכלי זה, השאר אינו נדרש. בשביל לקבל מידע נוסףבנוסף, מתבצעת בדיקה על פי צימניצקי, המראה אם ​​מדדי השתן ליום תקינים.

שיטות לקביעת חלבון בשתן
נוף	תת - זנים			מוזרויות
איכות	מבחן גלר			חקר השתן על נוכחות חלבון
	בדיקת חומצה סולפוסליצילית
	ניתוח רתיחה
כמותי		עכור	חלבון מהשתן יוצר אינטראקציה עם המגיב, וכתוצאה מכך ירידה במסיסותו. כמו ריאגנטים, חומצות sulfosalicylic ו trichloroacetic, בנזתוניום כלוריד משמשים.
		קולורימטרי	עם חומרים מסוימים, החלבון מהשתן משנה את צבעו. זהו הבסיס של תגובת הביורט ושיטת Lowry. משמשים גם ריאגנטים אחרים - כחול מבריק, אדום פירוגלול.
חצי כמותי			תן מושג יחסי של כמות החלבון, התוצאה מתפרשת על ידי שינוי הצבע של המדגם. שיטות חצי כמותיות כוללות רצועות בדיקה ושיטת ברנדברג-רוברטס-סטולניקוב.

חזרה לאינדקס

חלבון בשתן תקין אצל מבוגר לא יעלה על 0.033 גרם לליטר. במקרה זה, התעריף היומי אינו גבוה מ-0.05 גרם לליטר. עבור נשים בהריון, נורמת החלבון בשתן היומי היא יותר - 0.3 גרם לליטר, ובשתן בבוקר זהה - 0.033 גרם לליטר. הנורמות של חלבון בניתוח הכללי של שתן ואצל ילדים שונות: 0.036 גרם לליטר עבור מנת הבוקר ו-0.06 גרם לליטר ליום. לרוב, במעבדות, ניתוח מתבצע בשתי שיטות, המראות כמה חלק החלבון נמצא בשתן. ערכי הנורמה לעיל תקפים לניתוח המבוצע עם חומצה סולפוסיצילית. אם נעשה שימוש בצבע אדום פירוגלול, הערכים יהיו שונים בפקטור של שלושה.

חזרה לאינדקס

• סינון בגלומרולי הכליה הולך בדרך הלא נכונה;
• ספיגה בצינוריות של החלבון נפגעת;
• מחלות מסוימות עומסות כבדות על הכליות - כאשר החלבון בדם מוגבר, לכליות פשוט "אין זמן" לסנן אותו.

הגורמים הנותרים נחשבים לא כלייתיים. כך מתפתחת אלבומינוריה תפקודית. חלבון בבדיקת השתן מופיע עם תגובות אלרגיות, אפילפסיה, אי ספיקת לב, לוקמיה, הרעלה, מיאלומה, כימותרפיה ומחלות מערכתיות. לרוב, אינדיקטור זה בניתוחי המטופל הוא הפעמון הראשון של יתר לחץ דם.

עלייה בחלבון בשתן עשויה לנבוע מגורמים לא פתולוגיים, ולכן יידרשו בדיקות נוספות.

שיטות כמותיות לקביעת חלבון בשתן נותנות שגיאות, לכן מומלץ לבצע מספר ניתוחים, ולאחר מכן להשתמש בנוסחה כדי לחשב את הערך הנכון. תכולת החלבון בשתן נמדדת ב-g/l או mg/l. ערכי חלבון אלו מאפשרים לקבוע את רמת הפרוטאינוריה, להציע סיבה, להעריך את הפרוגנוזה ולהחליט על אסטרטגיה.

חזרה לאינדקס

לתפקוד מלא של הגוף, יש צורך בחילוף מתמיד בין דם לרקמות. זה אפשרי רק אם יש לחץ אוסמוטי מסוים בכלי הדם. חלבוני פלזמה בדם פשוט שומרים על רמת לחץ כזו כאשר חומרים נמוכים מולקולריים עוברים בקלות מסביבה עם ריכוז גבוה שלהם לסביבה עם סביבה נמוכה יותר. אובדן מולקולות החלבון מוביל לשחרור דם מהתעלה שלו אל הרקמות, הרצוף בצקת חמורה. כך מתבטאת פרוטאינוריה מתונה וחמורה.

השלבים הראשוניים של אלבומינוריה הם אסימפטומטיים. החולה שם לב רק לביטויים של המחלה הבסיסית, שהיא הגורם לחלבון בשתן.

עקבות פרוטאינוריה נקראת עלייה ברמת החלבון בשתן עקב שימוש במזונות מסוימים.

שתן לניתוח נאסף במיכל נקי ללא שומן. לפני האיסוף, האסלה של הפרינאום מוצגת, אתה צריך לשטוף אותו עם סבון. לנשים מומלץ לכסות את הנרתיק בחתיכת צמר גפן או טמפון כדי שהפרשות מהנרתיק לא ישפיעו על התוצאה. יום לפני, עדיף לא לשתות אלכוהול, מים מינרלים, קפה, חריף, מלוח ומזון שנותן צבע לשתן (אוכמניות, סלק). פעילות גופנית חזקה, הליכה ארוכה, מתח, חוםוהזעה, צריכה מופרזת של מזונות חלבונים או תרופותלפני מתן שתן, הם מעוררים את המראה של חלבון בבדיקת שתן של אדם בריא לחלוטין. תופעה נסבלת זו נקראת trace proteinuria.

חזרה לאינדקס

מחלת כליות המובילה לאובדן חלבון:

• עמילואידוזיס. תאים תקינים בכליות מוחלפים בעמילואידים (תסביך חלבון-סכריד), המונע מהאיבר לפעול כרגיל. בשלב הפרוטאינורי, עמילואידים מופקדים ברקמות הכליה, והורסים את הנפרון וכתוצאה מכך את המסנן הכלייתי. כך עובר חלבון מהדם אל השתן. שלב זה יכול להימשך יותר מ-10 שנים.
• נפרופתיה סוכרתית. עקב חילוף חומרים לא תקין של פחמימות ושומנים, מתרחש הרס של כלי דם, גלומרולי וצינוריות בכליה. חלבון בשתן הוא הסימן הראשון לסיבוך צפוי של סוכרת.
• מחלות ממקור דלקתי - דלקת כליות. לרוב, נגעים משפיעים כלי דם, גלומרולי ומערכות האגן, משבשות את המהלך התקין של מערכת הסינון.
• גלומרולונפריטיס ברוב המקרים היא אוטואימונית בטבעה. המטופל מתלונן על ירידה בכמות השתן, כאבי גב ועלייה בלחץ. לטיפול בגלומרולונפריטיס, מומלצים דיאטה, משטר וטיפול תרופתי.
• פיילונפריטיס. בתקופה החריפה ממשיך עם סימפטומים זיהום חיידקי: צמרמורת, בחילה, כְּאֵב רֹאשׁ. זוהי מחלה זיהומית.
• מחלת כליות פוליציסטית.

בגוף בריא, מולקולות חלבון (והן די גדולות בגודלן) אינן מסוגלות לעבור דרך מערכת הסינון של הכליות. לכן, לא אמור להיות חלבון בשתן. נתון זה זהה עבור גברים ונשים כאחד. אם הניתוח מצביע על פרוטאינוריה, חשוב להתייעץ עם רופא כדי לברר את הסיבות. המומחה יעריך עד כמה רמת החלבון גבוהה, האם יש פתולוגיה נלווית, כיצד לשחזר את התפקוד התקין של הגוף. על פי הסטטיסטיקה, הסיכון של אישה למחלה מערכת גניטורינאריתגבוה מזה של גבר.

עקרון השיטה מבוסס על קרישת חלבון בשתן בנוכחות חומצה חנקתית (או 20% חומצה סולפוסליצילית).

התקדמות: 1-2 טיפות של חומצה חנקתית (או סולפוסליצילית) מתווספות ל-5 טיפות שתן. אם יש חלבון בשתן, מופיעה עכירות.

שולחן. איתור מרכיבים פתולוגיים של שתן .

הערה:בנוכחות גלוקוז וחלבון בשתן הבדיקה, התוכן הכמותי שלהם נקבע.

עקרון השיטה : כאשר החלבון יוצר אינטראקציה עם פירוגלול אדום ונתרן מוליבדאט, נוצר קומפלקס צבעוני שעוצמת הצבע שלו פרופורציונלית לריכוז החלבון בדגימה.

ריאגנטים: ריאגנט עבודה - תמיסה אדומה של פירוגלול במאגר סוקסינאט, תמיסת כיול חלבון בריכוז של 0.50 גרם/ליטר

התקדמות:

לערבב דוגמאות, להחזיק 10 דקות. בְּ- טמפרטורת חדר(18 -25ºС). מדוד את הצפיפות האופטית של מדגם הניסוי (Dop) והכיול (Dk) מול מדגם הבקרה ב-λ=598 (578-610) ננומטר. הצבע יציב למשך שעה.

תַחשִׁיב: ריכוז חלבון בשתן (С) g/l לחישוב לפי הנוסחה:

С= Dop/Dk×0.50

איפה: Dop \u003d Dk \u003d C \u003d g/l.

ערכים תקינים: עד 0.094 גרם לליטר, (0.141 גרם ליום)

סיכום:

עקרון השיטה : כאשר D-גלוקוז מתחמצן על ידי חמצן אטמוספרי בפעולת גלוקוז אוקסידאז, נוצרת כמות שווה-מולרית של מי חמצן. תחת פעולת הפראוקסידאז, מי חמצן מחמצן מצעים כרומוגניים (תערובת של פנול ו-4 aminoantipyrine - 4AAP) עם היווצרות של מוצר צבעוני. עוצמת הצבע פרופורציונלית לתכולת הגלוקוז.

גלוקוז אוקסידאז

גלוקוז + O2 + H2O גלוקונולקטון + H2O2

פרוקסידאז

2H2O2 + פנול + תרכובת צבעונית 4AAP + 4H2O

התקדמות: הוסף 1 מ"ל תמיסת עבודה ו-0.5 מ"ל חיץ פוספט לשתי מבחנות. לצינור הראשון מוסיפים 0.02 מ"ל שתן, לצינור השני מוסיפים 0.02 מ"ל מהכייל (כיול, תמיסת גלוקוז סטנדרטית, 10 ממול/ליטר). הדגימות מעורבבות, נשמרות במשך 15 דקות בטמפרטורה של 370C בתרמוסטט, והצפיפות האופטית של הדגימות הניסיוניות (Dop) והכיול (Dc) נמדדת מול המגיב הפועל באורך גל של 500-546 ננומטר.

חישוב: С = Dop/Dk  10 mmol/l Dop= Dk =

סיכום:

הערה.אם תכולת הסוכר בשתן היא יותר מ-1%, יש לדלל אותה.

כיום, מעבדות ביוכימיות משתמשות בשיטה אקספרס מאוחדת לניתוח שתן עבור גלוקוז באמצעות נייר תגובתי עבור גלוקוז Glucotest או באמצעות רצועות בדיקה משולבות עבור pH, חלבון, גלוקוז, גופי קטוןודם. רצועות בדיקה מורידות לתוך כלי עם שתן למשך שנייה אחת. והשוו את סולם הצבעים.

קביעת חלבון באמצעות מחוון אדום של פירוגלול

עיקרון השיטה מבוסס על מדידה פוטומטרית של הצפיפות האופטית של תמיסה של קומפלקס צבעוני שנוצר על ידי אינטראקציה של מולקולות חלבון עם מולקולות של קומפלקס הצבע Pyrogallol Red-Molybdate קומפלקס במדיום חומצי. עוצמת הצבע של התמיסה פרופורציונלית לתכולת החלבון בחומר הבדיקה. נוכחותם של חומרי ניקוי במגיב מספקת קביעה שווה ערך של חלבונים בעלי אופי ומבנה שונים.

ריאגנטים. 1) תמיסה של 1.5 ממול/ליטר של פירוגלול אדום (PGD): 60 מ"ג של PGA מומסים ב-100 מ"ל מתנול. אחסן בטמפרטורה של 0-5 מעלות צלזיוס; 2) 50 mmol/l succinate buffer pH 2.5: 5.9 גרם חומצה סוקסינית (HOOC-CH2-CH2-COOH); 0.14 גרם נתרן אוקסלט (Na2C2O4) ו-0.5 גרם נתרן בנזואט (C6H5COONa) מומסים ב-900 מ"ל מים מזוקקים; 3) תמיסה של 10 mmol/l של סודיום מוליבדאט קריסטל הידרט (Na2MoO4 × 2H2O): 240 מ"ג של נתרן מוליבדאט מומסים ב-100 מ"ל מים מזוקקים; 4) ריאגנט עבודה: 40 מ"ל תמיסת PGA ו-4 מ"ל תמיסת נתרן מוליבדאט מתווספים ל-900 מ"ל תמיסת חיץ סוקסינאט. ה-pH של התמיסה מותאם ל-2.5 עם תמיסה של 0.1 מול/ליטר חומצה הידרוכלורית (HCl) והנפח מותאם ל-1 ליטר. המגיב בצורה זו מוכן לשימוש ויציב כאשר הוא מאוחסן במקום מוגן מאור ובטמפרטורה של 2-25 מעלות צלזיוס למשך 6 חודשים; 5) תמיסה סטנדרטית של אלבומין 0.5 גרם/ליטר.

התקדמות הגדרה. 0.05 מ"ל של שתן הבדיקה מתווספים לצינורית הראשונה, 0.05 מ"ל מהתמיסה הסטנדרטית של אלבומין מוסיפים לצינור השני, ו-0.05 מ"ל מים מזוקקים מוסיפים לצינור השלישי (דגימת בקרה), ולאחר מכן 3 מ"ל מהעבודה מגיב מתווספים לצינורות אלה. תכולת הצינורות מעורבת ולאחר 10 דקות הדגימה והתקן עוברות פוטומטר נגד דגימת הבקרה באורך גל של 596 ננומטר בקובטה בעלת אורך נתיב אופטי של 10 מ"מ.

חישוב ריכוז החלבון בדגימת השתן הבדיקה מתבצע על פי הנוסחה:

כאשר C הוא ריכוז החלבון בדגימת השתן הנבדקת, g/l; Apr and Ast - הכחדה של דגימת השתן שנחקרה ותמיסת אלבומין סטנדרטית, g/l; 0.5 - ריכוז תמיסה סטנדרטית של אלבומין, גרם/ליטר.

הערות:

• צבע התמיסה (קומפלקס צבע) יציב למשך שעה אחת;
• הקשר היחסי הישיר בין ריכוז החלבון בדגימת הבדיקה לבין ספיגת התמיסה תלוי בסוג הפוטומטר;
• כאשר תכולת החלבון בשתן היא מעל 3 גרם/ליטר, הדגימה מדוללת בתמיסת נתרן כלוריד איזוטונית (9 גרם/ליטר) והקביעה חוזרת על עצמה. מידת הדילול נלקחת בחשבון בעת ​​קביעת ריכוז החלבון.

ראה גם:

• קביעת חלבון בשתן
• בדיקה סטנדרטית עם חומצה סולפוסיצילית
• שיטת ברנדברג-רוברטס-סטולניקוב מאוחדת
• קביעת כמות החלבון בשתן על ידי תגובה עם חומצה סולפוסיצילית
• שיטת ביורט
• זיהוי חלבון בנס-ג'ונס בשתן

פרוטאינוריה היא תופעה בה נקבע חלבון בשתן, המעיד על אפשרות של פגיעה בכליות, משמש כגורם להתפתחות מחלות לב, דם וכלי לימפה.

גילוי חלבון בשתן לא תמיד מעיד על מחלה. תופעה זו אופיינית אפילו עבור אבסולוטית אנשים בריאים, בשתן שניתן לקבוע חלבון שלו. היפותרמיה, פעילות גופנית, שימוש במזון חלבוני מביא להופעת חלבון בשתן, שנעלם ללא כל טיפול.

במהלך ההקרנה, חלבון מתגלה ב-17% מהאנשים הבריאים לכאורה, אך רק 2% ממספר זה של אנשים תוצאת בדיקה חיובית היא סימן למחלת כליות.

מולקולות חלבון לא צריכות להיכנס לדם. הם חיוניים לגוף חומר בנייןעבור תאים, משתתפים בתגובות כמו קו-אנזימים, הורמונים, נוגדנים. אצל גברים ונשים כאחד, הנורמה היא היעדר מוחלט של חלבון בשתן.

הפונקציה של מניעת איבוד מולקולות חלבון מהגוף מתבצע על ידי הכליות.

ישנן שתי מערכות של הכליות המסננות שתן:

1. glomeruli של הכליה - לא לתת למולקולות גדולות לעבור, אבל לא לשמור אלבומינים, גלובולינים - חלק קטן של מולקולות חלבון;
2. צינוריות כליה - סופחים חלבונים המסונננים על ידי הגלומרולי, חוזרים חזרה למערכת הדם.

בשתן נמצאים אלבומינים (כ-49%), מוקופרוטאינים, גלובולינים, מהם אימונוגלובולינים מהווים כ-20%.

גלובולינים הם חלבוני מי גבינה במשקל מולקולרי גבוה המיוצרים על ידי מערכת החיסון והכבד. רובם מסונתזים מערכת החיסון, מתייחס לאימונוגלובולינים או נוגדנים.

אלבומינים הם חלק החלבונים שהם הראשונים להופיע בשתן עם נזק קל לכליות. כמות מסוימת של אלבומין נמצאת גם בשתן בריא, אבל היא כל כך חסרת משמעות עד שהיא לא מתגלה באמצעות אבחון מעבדה.

הסף התחתון, שניתן לזהות באמצעות אבחון מעבדה, הוא 0.033 גרם לליטר. אם יאבדו יותר מ-150 מ"ג חלבון ביום, אז הם מדברים על פרוטאינוריה.

עובדות מפתח על חלבון בשתן

המחלה עם דרגה קלה של פרוטאינוריה היא אסימפטומטית. מבחינה ויזואלית, לא ניתן להבחין בין שתן שאינו מכיל חלבון לבין שתן המכיל כמות קטנה של חלבון. שתן קצף משהו הופך כבר בשעה מעלות גבוהותפרוטאינוריה.

ניתן להניח הפרשה פעילה של חלבון בשתן על ידי מראה חיצוניהחולה רק עם דרגה מתונה או חמורה של המחלה עקב הופעת בצקת של הגפיים, הפנים, הבטן.

עַל שלבים מוקדמיםמחלות סימנים עקיפיםפרוטאינוריה יכולה לשמש כתסמינים:

• שינויים בצבע השתן;
• חולשה גוברת;
• חוסר תיאבון;
• בחילות והקאות;
• כאב עצם;
• נמנום, סחרחורת;
• טמפרטורה גבוהה.

אין להתעלם מהופעת סימנים כאלה, במיוחד במהלך ההריון. משמעות הדבר עשויה להיות סטייה קלה מהנורמה, ועשויה להיות סימפטום להתפתחות רעלת הריון, רעלת הריון.

כימות אובדן חלבון אינה משימה קלה; מספר בדיקות מעבדה משמשות כדי להשיג תמונה מלאה יותר של מצבו של המטופל.

קשיים בבחירת שיטה לאיתור עודף חלבון בשתן מוסבר על ידי:

• ריכוז חלבון נמוך, לשם ההכרה בהם נדרשים מכשירים בעלי דיוק גבוה;
• הרכב השתן, אשר מסבך את המשימה, מכיוון שהוא מכיל חומרים המעוותים את התוצאה.

את המידע הגדול ביותר ניתן לקבל מניתוח מנת השתן הראשונה של הבוקר, שנאספת לאחר ההתעוררות.

ערב הניתוח יש להקפיד על התנאים הבאים:

• אין להשתמש במזונות חריפים, מטוגנים, חלבונים, אלכוהול;
• הימנע מנטילת משתנים למשך 48 שעות;
• הגבלת פעילות גופנית;
• פעל בקפידה על כללי ההיגיינה האישית.

שתן בוקר הוא האינפורמטיבי ביותר, שכן הוא נשאר בשלפוחית ​​השתן במשך זמן רב, ובמידה פחותה תלוי בצריכת המזון.

אפשר לנתח את כמות החלבון בשתן לפי מנה אקראית, הנלקחת בכל עת, אבל ניתוח כזה הוא פחות אינפורמטיבי, והסבירות לטעות גבוהה יותר.

כדי לכמת את האובדן היומי של חלבון, נעשה ניתוח של סך השתן היומי. לשם כך, תוך 24 שעות, כל השתן המופרש במהלך היום נאסף במיכל פלסטיק מיוחד. אתה יכול להתחיל לאסוף בכל עת. התנאי העיקרי הוא בדיוק יום אחד של איסוף.

ההגדרה האיכותית של פרוטאינוריה מבוססת על התכונה של החלבון לדנטורציה בהשפעת גורמים פיזיקליים או כימיים. שיטות איכותניות הן שיטות סקר המאפשרות לקבוע נוכחות חלבון בשתן, אך אינן מאפשרות להעריך במדויק את מידת החלבון.

דגימות בשימוש:

• עם רתיחה;
• חומצה סולפוסיצילית;
• חומצה חנקתית, המגיב של לריונובה עם בדיקת הטבעת של הלר.

בדיקה עם חומצה סולפוסליצילית מתבצעת על ידי השוואת דגימת שתן בקרה עם ניסוי, בה מוסיפים לשתן 7-8 טיפות של חומצה סולפוסליצילית 20%. המסקנה לגבי נוכחות החלבון נעשית על ידי עוצמת העכירות העכורה המופיעה במבחנה במהלך התגובה.

לעתים קרובות יותר, מבחן גלר משמש באמצעות 50% חומצה חנקתית. רגישות השיטה היא 0.033 גרם/ליטר. בריכוז זה של חלבון במבחנה עם דגימת שתן וריאגנט מופיעה טבעת חוטית לבנה 2-3 דקות מתחילת הניסוי, שהיווצרותה מעידה על נוכחות החלבון.

מבחן גלר

שיטות כמותיות למחצה כוללות:

• שיטה לקביעת חלבון בשתן עם רצועות בדיקה;
• שיטת ברנדברג-רוברטס-סטולניקוב.

שיטת קביעת ברנדברג-רוברטס-סטולניקוב מבוססת על שיטת טבעת גלר, אך מאפשרת הערכה מדויקת יותר של כמות החלבון. בעת ביצוע בדיקה לפי שיטה זו, מספר דילול שתן משיג מראה של טבעת חלבון חוט במרווח הזמן שבין 2-3 דקות מתחילת הבדיקה.

בפועל, נעשה שימוש בשיטה של ​​רצועות בדיקה עם צבע מיושם ברומופנול כחול כאינדיקטור. החיסרון של רצועות הבדיקה הוא הרגישות הסלקטיבית לאלבומין, המובילה לעיוות התוצאה במקרה של עלייה בריכוז הגלובולינים או חלבונים אחרים בשתן.

חסרונות השיטה כוללים גם את הרגישות הנמוכה יחסית של הבדיקה לחלבון. רצועות הבדיקה מתחילות להגיב לנוכחות חלבון בשתן בריכוז חלבון העולה על 0.15 גרם לליטר.

ניתן לחלק את שיטות הכימות באופן מותנה ל:

1. עכור;
2. קולורימטרי.

השיטות מבוססות על התכונה של חלבונים להפחית את המסיסות בפעולה של חומר מקשר עם היווצרות של תרכובת מסיסות גרוע.

חומרים קושרים חלבונים יכולים להיות:

• חומצה סולפוסיצילית;
• חומצה טריכלורואצטית;
• בנזתוניום כלוריד.

תוצאות הבדיקות מסתיימות על סמך מידת הנחתה של שטף האור בדגימת התרחיף בהשוואה לביקורת. לא תמיד ניתן לייחס את התוצאות של שיטה זו לאמינות בשל הבדלים בתנאי הביצוע: מהירות ערבוב הריאגנטים, טמפרטורה, חומציות המדיום.

להשפיע על הערכת נטילת תרופות יום לפני, לפני ביצוע בדיקות בשיטות אלה, אתה לא יכול לקחת:

• אַנְטִיבִּיוֹטִיקָה;
• סולפנאמידים;
• תכשירי יוד.

השיטה משתלמת, מה שמאפשר שימוש נרחב בהקרנה. אך ניתן להשיג תוצאות מדויקות יותר באמצעות טכניקות קולורימטריות יקרות יותר.

טכניקות קולורימטריות הן בין השיטות הרגישות לקביעה מדויקת של ריכוז החלבון בשתן.

כדי לעשות זאת עם דיוק גבוה אפשר:

• תגובה ביורה;
• הטכניקה של לורי;
• טכניקות צביעה המשתמשות בצבעים היוצרים קומפלקסים עם חלבוני שתן השונים מבחינה ויזואלית מהדגימה.

שיטות קולורימטריות לאיתור חלבון בשתן

השיטה אמינה, רגישה ביותר, מאפשרת קביעת אלבומין, גלובולינים, פראפרוטאינים בשתן. הוא משמש כדרך העיקרית להבהרת תוצאות בדיקות שנויות במחלוקת, כמו גם חלבון יומי בשתן בחולים עם מחלקות נפרולוגיות בבתי חולים.

אפילו יותר תוצאות מדויקותמאפשרת להשיג את שיטת Lowry, המבוססת על תגובת הביורט, וכן את תגובת Folin, המזהה טריפטופן וטירוזין במולקולות חלבון.

כדי למנוע טעויות אפשריות, דגימת השתן מטוהרת על ידי דיאליזה מחומצות אמינו, חומצת שתן. שגיאות אפשריות בשימוש בסליצילטים, טטרציקלינים, כלורפרומאזין.

הדרך המדויקת ביותר לקבוע חלבון מבוססת על יכולתו להיקשר לצבעים, שבהם משתמשים:

• פונסאו;
• coumasi כחול מבריק;
• pyrogall אדום.

במהלך היום משתנה כמות החלבון המופרשת בשתן. על מנת להעריך בצורה אובייקטיבית יותר את אובדן החלבון בשתן, המושג חלבון יומי בשתן מוצג. ערך זה נמדד בגר' ליום.

להערכה מהירה של החלבון היומי בשתן, כמות החלבון והקריאטינין נקבעת במנת שתן בודדת, לאחר מכן, יחס החלבון/קריאטינין משמש לקביעת אובדן החלבון ליום.

השיטה מבוססת על כך שקצב ההפרשה של קריאטינין בשתן הוא ערך קבוע, אינו משתנה במהלך היום. באדם בריא, היחס התקין של חלבון:קריאטינין בשתן הוא 0.2.

שיטה זו לא כוללת טעויות אפשריותשעלולים להתרחש במהלך איסוף השתן היומי.

דגימות איכותיות נוטות יותר מבדיקות כמותיות לתת תוצאות חיוביות שגויות או שליליות שגויות. מתרחשות טעויות בקשר לנטילת תרופות, הרגלי אכילה, פעילות גופנית ערב הבדיקה.

הפרשנות של בדיקה איכותית זו ניתנת על ידי הערכה ויזואלית של עכירות במבחנה בהשוואה של תוצאת הבדיקה עם הבקרה:

1. תגובה חיובית חלשה מוערכת כ-+;
2. ++ חיובי;
3. חיובי חד +++.

בדיקת הטבעת של הלר מדויקת יותר בהערכת נוכחות חלבון בשתן, אך אינה מכמתת חלבון בשתן. כמו בדיקת החומצה הסולפוסליצילית, בדיקת הלר נותנת רק מושג גס על כמות החלבון בשתן.

השיטה מאפשרת לכמת את מידת החלבון, אבל היא מייגעת מדי, לא מדויקת, שכן עם דילול חזק, הדיוק של ההערכה יורד.

כדי לחשב את החלבון, עליך להכפיל את מידת דילול השתן ב-0.033 גרם לליטר:

1	1	1: 2	0,066
1	2	1: 3	0,099
1	3	1: 4	0,132
1	4	1: 5	0,165
1	5	1: 6	0,198
1	6	1: 7	0,231
1	7	1: 8	0,264
1	8	1: 9	0,297
1	9	1: 10	0,33

הבדיקה אינה דורשת תנאים מיוחדים, הליך זה קל לעשות בבית. כדי לעשות זאת, עליך להוריד את רצועת הבדיקה לתוך השתן למשך 2 דקות.

התוצאות יבואו לידי ביטוי במספר הפלוסים על הרצועה, שהפענוח שלה כלול בטבלה:

1. תוצאות הבדיקה המתאימות לערכים של עד 30 מ"ג/100 מ"ל תואמות פרוטאינוריה פיזיולוגית.
2. ערכי רצועות בדיקה של 1+ ו-2++ מצביעים על פרוטאינוריה משמעותית.
3. ערכים 3+++, 4++++ נצפים בפרוטאינוריה פתולוגית הנגרמת על ידי מחלת כליות.

רצועות בדיקה יכולות רק לקבוע בערך את כמות החלבון המוגבר בשתן. ל אבחנה מדויקתהם אינם בשימוש, ואף יותר מכך הם אינם יכולים לומר מה זה אומר.

אל תאפשר לרצועות הבדיקה להעריך כראוי את כמות החלבון בשתן של נשים הרות. שיטה אמינה יותר להערכה היא קביעת החלבון בשתן היומי.

קביעת חלבון בשתן באמצעות רצועת בדיקה:

חלבון יומי בשתן משמש כאבחנה מדויקת יותר להערכת המצב התפקודי של הכליות. כדי לעשות זאת, אתה צריך לאסוף את כל השתן המופרש על ידי הכליות ליום.

ערכים מקובלים עבור היחס בין חלבון / קריאטינין הם הנתונים המופיעים בטבלה:

אם אתה מאבד יותר מ-3.5 גרם חלבון ליום, המצב נקרא פרוטאינוריה מסיבית.

אם יש הרבה חלבון בשתן, נדרשת בדיקה שנייה לאחר חודש, ולאחר מכן לאחר 3 חודשים, לפי תוצאותיהן נקבע מדוע חריגה מהנורמה.

גורם ל חלבון מוגברבשתן יש את הייצור המוגבר שלו בגוף והפרעה בכליות, יש להבחין בין פרוטאינוריה:

• פיזיולוגי - חריגות קלות מהנורמה נגרמות על ידי תהליכים פיזיולוגיים, נפתרות באופן ספונטני;
• פתולוגי - שינויים נגרמים כתוצאה מתהליך פתולוגי בכליות או באיברים אחרים בגוף, מתקדם ללא טיפול.

ניתן להבחין בעלייה קלה בחלבון עם תזונת חלבון בשפע, כוויות מכניות, פציעות, מלווה בעלייה בייצור של אימונוגלובולינים.

מידה קלה של פרוטאינוריה יכולה להיגרם מפעילות גופנית, מתח פסיכו-רגשי ונטילת תרופות מסוימות.

פרוטאינוריה פיזיולוגית מתייחסת לעלייה בחלבון בשתן אצל ילדים בימים הראשונים לאחר הלידה. אבל כבר לאחר שבוע בחיים, תכולת החלבון בשתן של ילד נחשבת לסטייה מהנורמה ומצביעה על פתולוגיה מתפתחת.

מחלות כליות, מחלות זיהומיות מלוות לעיתים גם בהופעת חלבון בשתן.

מצבים כאלה תואמים בדרך כלל מידה קלה של פרוטאינוריה, הם תופעות חולפות, נעלמות במהירות מעצמן, ללא צורך בטיפול מיוחד.

מצבים חמורים יותר, פרוטאינוריה חמורה מצוינת במקרה של:

• גלומרולונפריטיס;
• סוכרת
• מחלת לב;
• סרטן שלפוחית ​​השתן;
• מיאלומה נפוצה;
• זיהום, פגיעה הנגרמת על ידי תרופות, מחלת כליות פוליציסטית;
• לחץ דם גבוה;
• זאבת אדמנתית מערכתית;
• תסמונת Goodpasture.

חסימת מעיים, אי ספיקת לב, יתר פעילות בלוטת התריס עלולים לגרום לעקבות חלבון בשתן.

זנים של פרוטאינוריה מסווגים בכמה דרכים. להערכה איכותית של חלבונים, אתה יכול להשתמש בסיווג Yaroshevsky.

על פי השיטתיות של ירושבסקי, שנוצרה בשנת 1971, נבדלת פרוטאינוריה:

1. כליות - הכוללת את ההפרה סינון גלומרולרי, הפרשת חלבון צינורי, חוסר ספיגת חלבון בצינוריות;
2. prerenal - מתרחש מחוץ לכליות, הפרשת המוגלובין, חלבונים המופיעים בעודף בדם כתוצאה ממיאלומה נפוצה;
3. postrenal - מתרחשת באזור דרכי השתן שאחרי הכליות, הפרשת חלבון במהלך הרס איברי השתן.

כדי לכמת את המתרחש, מידת הפרוטאוריה מבודדת באופן מותנה. יש לזכור שהם יכולים בקלות להחמיר ללא טיפול.

השלב החמור ביותר של פרוטאינוריה מתפתח כאשר יותר מ-3 גרם חלבון אובדים ביום. איבוד חלבון מ-30 מ"ג ל-300 מ"ג ליום מתאים לשלב מתון או למיקרואלבמנוריה. עד 30 מ"ג חלבון בשתן יומי פירושו דרגה קלה של פרוטאינוריה.

כמה חלבון בשתן?

1. בדרך כלל, כמעט ואין חלבון בשתן (פחות מ-0.002 גרם לליטר). עם זאת, בתנאים מסוימים, כמות קטנה של חלבון עשויה להופיע בשתן של אנשים בריאיםלאחר נטילת כמות גדולה של מזון חלבון, כתוצאה מקירור, עם מתח רגשי, פעילות גופנית ממושכת (מה שנקרא פרוטאינוריה צועדת).

   הופעת כמות משמעותית של חלבון בשתן (פרוטאינוריה) היא פתולוגיה. פרוטאינוריה יכולה להיגרם על ידי מחלות של הכליות (גלומרולונפריטיס חריפה וכרונית, פיאלונפריטיס, נפרופתיה של הריון וכו') או דרכי השתן (דלקת שלפוחית ​​השתן, הערמונית, השופכנים). פרוטאינוריה כלייתית יכולה להיות אורגנית (גלומרולרית, צינורית ומוגזמת) ופונקציונלית (פרוטאינוריה קדחתנית, אורתוסטטית אצל מתבגרים, עם תינוקות שמזינים יתר על המידה, ביילודים). פרוטאינוריה פונקציונלית אינה קשורה לפתולוגיה כלייתית. כמות החלבון היומית משתנה בחולים בין 0.1 ל-3.0 גרם או יותר. הרכב חלבוני השתן נקבע על ידי אלקטרופורזה. הופעת חלבון בנס-ג'ונס בשתן אופיינית למיאלומה נפוצה ול-Waldenström's macroglobulinemia, #223;2 microglobulin במקרה של פגיעה באבוביות הכליה.

2. בדרך כלל, אין כמעט חלבון בשתן (פחות מ-0.002 גרם/ליטר).
3. הסימנים העיקריים למחלה שזוהו במחקר השתן.

   SG משקל סגולי. יְרִידָה משקל סגולימצביע על ירידה ביכולת הכליות לרכז שתן ולסלק רעלים מהגוף, מה שקורה עם אי ספיקת כליות. העלייה במשקל הסגולי קשורה לכמות גדולה של סוכר ומלחים בשתן. יש לציין שאי אפשר להעריך את המשקל הסגולי בבדיקת שתן אחת בלבד, ייתכנו שינויים אקראיים, יש צורך לחזור על בדיקת שתן 1-2 פעמים.

   חלבון חלבון בשתן - פרוטאינוריה. הגורם לפרוטאינוריה יכול להיות נזק לכליות עצמן עם דלקת כליות, עמילואידוזיס, נזק על ידי רעלים. חלבון בשתן עשוי להופיע גם עקב מחלות בדרכי השתן (פיאלונפריטיס, דלקת שלפוחית ​​השתן, דלקת הערמונית).

   גלוקוז גלוקוז (סוכר) בשתן - גלוקוזוריה - נגרם לרוב על ידי סוכרת. יותר סיבה נדירה- נזק לצינוריות הכליה. זה מאוד מדאיג אם גופי קטון נקבעים יחד עם סוכר בשתן. זה קורה עם חמור, לא מווסת סוכרתוהוא מבשר על הסיבוך החמור ביותר של סוכרת - תרדמת סוכרתית.

   בילירובין, Urobilinogen בילירובין ו-urobilin נקבעים בשתן בצורות שונות של צהבת.

   אריתרוציטים אריתרוציטים בשתן - המטוריה. זה קורה עם פגיעה בכליות עצמן, לרוב עם הדלקת שלהן, או בחולים עם מחלות בדרכי השתן. אם, למשל, אבן נעה לאורכם, היא עלולה לפצוע את הקרום הרירי, יהיו כדוריות דם אדומות בשתן. גידול כליה מתכלה יכול גם להוביל להמטוריה.

   לויקוציטים לויקוציטים בשתן - לויקוציטוריה, לרוב תוצאה של שינויים דלקתיים בדרכי השתן בחולים עם פיאלונפריטיס, דלקת שלפוחית ​​השתן. Leukocytes נקבעים לעתים קרובות עם דלקת של איברי המין החיצוניים הנשיים, אצל גברים - עם דלקת של בלוטת הערמונית.

   צילינדרים צילינדרים הם תצורות מיקרוסקופיות מוזרות. צילינדרים Hyaline בכמות של 1-2 יכולים להיות באדם בריא. הם נוצרים בצינוריות הכליה, אלו חלקיקים של חלבון הדבוקים זה לזה. אבל עלייה במספרם, גלילים מסוגים אחרים (גרגירים, אריתרוציטים, שומניים) תמיד מעידים על נזק לרקמת הכליה עצמה. ישנם צילינדרים במחלות דלקתיות של הכליות, נגעים מטבוליים, למשל, סוכרת.

   אינפורמטיביות של השיטה וגבולותיה. אינפורמטיביות של הניתוח הכללי של שתן להכרה מחלות ספציפיותמחלת כליות נמוכה, בדרך כלל נדרשים מחקרים נוספים ומדויקים יותר. אבל מחקר זה חשוב מאוד, במיוחד כאשר עורכים מחקרים מונעים, מכיוון שהוא מאפשר לזהות סימנים מוקדמים של מחלת כליות. ידוע גם שלעיתים קרובות מחלות כליות נסתרות, ורק בדיקת שתן מאפשרת לחשוד בהן ולערוך בדיקות הכרחיות נוספות.

4. ברוב המעבדות, כאשר בודקים שתן עבור חלבון, משתמשים תחילה בתגובות איכותיות שאינן מזהות חלבון בשתן של אדם בריא. אם החלבון בשתן מזוהה על ידי תגובות איכותיות, מבוצעת קביעה כמותית (או חצי כמותית). יחד עם זאת, התכונות של השיטות בהן נעשה שימוש, המכסות ספקטרום שונה של אורפרוטאינים, חשובות. לפיכך, בקביעת חלבון באמצעות חומצה סולפוסליצילית 3%, כמות החלבון של עד 0.03 גרם/ליטר נחשבת תקינה, בעוד בשיטת פירוגלול, גבול ערכי החלבון הנורמליים עולה ל-0.1 גרם/ליטר. בהקשר זה, על טופס הניתוח לציין את הערך התקין של החלבון לשיטה בה משתמשת המעבדה.

   בעת קביעת כמויות החלבון המינימליות, מומלץ לחזור על הניתוח, במקרים מפוקפקים יש לקבוע את אובדן החלבון היומי בשתן. שתן יומי רגיל מכיל חלבון בלא כמויות משמעותיותאה. בתנאים פיזיולוגיים, החלבון המסונן נספג מחדש כמעט לחלוטין באפיתל של הצינוריות הפרוקסימליות ותכולתו בכמות השתן היומית משתנה לפי מחברים שונים מעקבות ל-20-50, 80-100 מ"ג ואפילו עד 150-200 מ"ג. חלק מהכותבים מאמינים כי הפרשת חלבון יומית בכמות של 30-50 מ"ג ליום היא נורמה פיזיולוגיתלמבוגר. אחרים מציעים שהפרשת חלבון בשתן לא תעלה על 60 מ"ג/מ"ר משטח הגוף ליום, למעט בחודש הראשון לחיים, כאשר הפרוטאוריה הפיזיולוגית עשויה להיות פי ארבעה מהערך המצוין.

   התנאי הכללי להופעת חלבונים בשתן של אדם בריא הוא ריכוז גבוה מספיק שלהם בדם ומשקל מולקולרי של לא יותר מ 100-200 kDa.

5. זה לא הנורמה, עם האבחנה שלך זה אפשרי, דבר נוסף הוא שלתסמונת נפרוטית זה בעצם אינדיקטור קטן.. תסתכל על המרפאה - נפיחות, לחץ וכו' תמשיך לקחת את הטיפול שנקבע..
6. ובכל זאת אני אגיד: זה לא צריך להיות נורמלי!

שיטת ברנדברג-רוברטס-סטולניקוב מתייחסת לשיטות חצי-כמותיות לקביעת סך החלבון בשתן. השיטה מבוססת על בדיקת הטבעת של הלר, המורכבת מכך שבגבול החומצה החנקתית והשתן, בנוכחות חלבון, היא מתקרשת ומופיעה טבעת לבנה.

ריאגנטים

תמיסת חומצה חנקתית 50% או מגיב לריונובה.
הכנת מגיב Larionova: הכן תמיסה רוויה של נתרן כלורי (20 - 30 גרם מלח מומס ב-100 מ"ל מים כאשר הוא מחומם, מניחים לעמוד עד להתקררות). הסופרנטנט מרוקן, מסונן. ל-99 מ"ל מהתסנין מוסיפים 1 מ"ל של חומצה חנקתית מרוכזת. במקום חומצה חנקתית ניתן להוסיף 2 מ"ל חומצה הידרוכלורית מרוכזת.

התקדמות הגדרה

1 - 2 מ"ל של חומצה חנקתית (או ריאגנט לאריוני) יוצקים למבחנה, החומצה ניתנת לניקוז מדפנות המבחנה (5 - 8 דקות), אחרת, כאשר שתן חלבון מרובד, נוצרת עכירות עקב ערבוב של חומצה חנקתית על דפנות המבחנה עם שתן, המונע היווצרות של טבעת ברורה. לכן, יש להכין מראש סדרת מבחנות עם חומצה. בעזרת פיפטה, שכבו בזהירות את אותה כמות מים מסוננים על דופן המבחנה. שתן צלוללהיזהר לא לנער את הנוזל במבחנה. הופעת טבעת לבנה דקה בממשק בין שני הנוזלים בין הדקה השנייה ל-3 מעידה על נוכחות חלבון בריכוז של כ-0.033 גרם/ליטר. זמן השכבה נספר כרבע דקה.

אם הטבעת מופיעה לפני 2 דקות לאחר השכבה, יש לדלל את השתן במים ולבצע שכבות חוזרות של שתן שכבר דולל. דרגת דילול השתן נבחרת בהתאם לסוג הטבעת, כלומר רוחבה, הקומפקטיות וזמן הופעתה. עם טבעת פיליפורמית שהופיעה לפני 2 דקות, השתן מדולל 2 פעמים, עם רחבה - 4 פעמים, עם קומפקטית - 8 פעמים וכו'. דילול השתן נעשה בשפופרת צנטריפוגה מדידה, שפיכת שתן ל- סימון 1 מ"ל והוספת מים עד לסימון, כמה פעמים מתבצעת הרבייה. תוכן המבחנה מעורבב היטב עם פיפטת פסטר עם בלון. אם מופיעה עכירות במהלך דילול השתן, יש לסנן שוב את התערובת ורק את התסנין השקוף יש לשכב על חומצה חנקתית. לאחר מכן מחשבים את ריכוז החלבון על ידי הכפלה של 0.033 ביחס הדילול ומבוטאת בגרמים לליטר (g/l). דילול שתן כזה נבחר כך שכאשר הוא מרובד על חומצה חנקתית, הטבעת מופיעה בדקה ה-2-3.

במקרה שנוצרת טבעת בין הדקה ה-1 ל-4 עם שתן לא מדולל או מדולל, ניתן להשתמש בתיקון ארליך-אלטהאוזן על מנת לא לדלל עוד יותר את השתן (זה חוסך זמן). המחברים הציעו לקבוע את זמן הופעת הטבעת החוטים ולתקן את החישוב לזמן. במקרה זה, כמות החלבון מחושבת על ידי הכפלת 0.033 גרם/ליטר במידת הדילול ועל ידי התיקון.

כאשר נוצרת טבעת לפני תום דקה, יש לבצע דילול חלקי אחד, כלומר פי 1.5 (שני חלקי שתן וחלק אחד של מים). דילול זה נלקח בחשבון גם בחישוב כמות החלבון בשתן.

דוגמה לקביעת סך החלבון בשתן בשיטת ברנדברג-רוברטס-סטולניקוב.

כאשר משכבים שתן על המגיב, נוצרת מיד טבעת רחבה. שתן מדולל 4 פעמים (חלק אחד של שתן + 3 חלקים של מים), בשכבות; טבעת פיליפורמית מתקבלת מיד. יש צורך לדלל את הדילול הקיים בעוד 2 פעמים; כאשר משכבים את הדילול הזה, נוצרת טבעת לאחר 1.5 דקות. אתה כבר לא יכול להתרבות.

חישוב חלבון: השתן היה מדולל 4 ו-2 פעמים, לפיכך, 8 פעמים. כמות החלבון היא 0.033*8*1 1/4 = 0.33 גרם/ליטר

החסרונות של שיטת ברנדברג-רוברטס-סטולניקוב:

• סובייקטיביות,
• עמל,
• ירידה ברמת הדיוק של קביעת ריכוז החלבון עם דילול השתן.

ראה גם:

סִפְרוּת:

• מדריך "שיטות מחקר מעבדתי בקליניקה", עורך. פרופ' V. V. Menshikov. - מוסקבה, "רפואה", 1987
• L. V. Kozlovskaya, A. Yu. Nikolaev. ספר לימוד על שיטות מחקר במעבדה קלינית. מוסקבה, רפואה, 1985
• א. יא. אלטהאוזן, "אבחון מעבדה קליני" - מוסקבה, מדגיז, 1959
• A. Ya. Lyubina, L. P. Ilyicheva ומחברים שותפים, "Clinical מחקר מעבדה", מוסקבה, "רפואה", 1984

כמויות קטנות של חלבון נמצאות בשתן היומי של אנשים בריאים. עם זאת, לא ניתן לזהות ריכוזים קטנים כאלה באמצעות שיטות מחקר קונבנציונליות. הפרשה של כמויות גדולות יותר של חלבון, שבהן הבדיקות האיכותיות הרגילות לחלבון בשתן הופכות לחיוביות, נקראת פרוטאינוריה. יש פרוטאינוריה כלייתית (אמיתית) וחוץ-כליתית (שקרית). בפרוטאינוריה כלייתית, חלבון חודר לשתן ישירות מהדם עקב עלייה בסינונו על ידי הגלומרולי של הכליה או ירידה בספיגה החוזרת של הצינורית.

פרוטאינוריה כלייתית (אמיתית).

פרוטאינוריה כלייתית (אמיתית) היא פונקציונלית ואורגנית. בין פרוטאינוריה כלייתית תפקודית, לרוב נצפים הסוגים הבאים:

פרוטאינוריה פיזיולוגית של יילודים, שנעלמת ביום הרביעי - העשירי לאחר הלידה, ואצל פגים מעט מאוחר יותר;
- אלבומינוריה אורתוסטטית, האופיינית לילדים בגילאי 7-18 שנים ומופיעה רק במצב זקוף של הגוף;
- אלבומינוריה חולפת (שבץ) העלולה להיגרם ממחלות שונות של מערכת העיכול, אנמיה חמורה, כוויות, פציעות או גורמים פיזיולוגיים: מאמץ גופני כבד, היפותרמיה, רגשות עזים, מזון בשפע, עשיר בחלבון וכו'.

פרוטאינוריה אורגנית (כלייתית) נצפית עקב מעבר חלבון מהדם דרך אזורים פגומים של האנדותל של הגלומרולי הכלייתי במחלות כליה (גלומרולונפריטיס, נפרוזה, נפרוסתקלרוזיס, עמילואידוזיס, נפרופתיה בהריון), הפרעות בהמודינמיקה הורידית הכלייתית (כליות). יתר לחץ דם, היפוקסיה), השפעות טרופיות ורעילות (כולל כולל תרופתיות) על דפנות הנימים הגלומרולריים.

פרוטאינוריה חוץ-כליתית (שקר).

פרוטאינוריה חוץ-כליתית (שקרית), שבה מקור החלבון בשתן הוא תערובת של לויקוציטים, אריתרוציטים, חיידקים, תאי אורותל. נצפה במחלות אורולוגיות ( מחלת אורוליתיאזיס, שחפת של הכליות, גידולים של הכליות ודרכי השתן וכו').

קביעת חלבון בשתן

רוב השיטות האיכותיות והכמותיות לקביעת חלבון בשתן מבוססות על קרישתו בנפח השתן או בממשק המדיה (שתן וחומצה).

בין השיטות האיכותיות לקביעת bedka בשתן, הבדיקה המאוחדת עם חומצה sulfosalicylic ובדיקת הטבעת הלר נמצאים בשימוש נרחב ביותר.

דגימה סטנדרטית עם חומצה sulfasalicylic מתבצעת כדלקמן. 3 מ"ל של שתן מסונן מוזגים ל-2 צינורות. באחד מהם הוסף 6-8 טיפות של תמיסה 20% של חומצה סולפאסליצילית. שני הצינורות מושווים על רקע כהה. עכירות שתן במבחנה עם חומצה sulfasalicylic מצביעה על נוכחות של חלבון. לפני המחקר, יש צורך לקבוע את התגובה של שתן, ואם הוא אלקליין, אז חומצי עם 2-3 טיפות של פתרון 10% של חומצה אצטית.

בדיקת גלר מבוססת על כך שבנוכחות חלבון בשתן בגבול החומצה החנקתית והשתן הוא מתקרש ומופיעה טבעת לבנה. 1-2 מ"ל של תמיסה 30% של חומצה חנקתית מוזגים למבחנה ובדיוק אותה כמות של שתן מסונן מונחת בזהירות לאורך דופן המבחנה. הופעת טבעת לבנה בממשק בין שני נוזלים מעידה על נוכחות חלבון בשתן. יש לזכור שלפעמים נוצרת טבעת לבנה בנוכחות כמות גדולה של urates, אך בניגוד לטבעת החלבון, היא מופיעה מעט מעל הגבול בין שני נוזלים ומתמוססת בחימום [Pletneva N.G., 1987].

השיטות הכמותיות הנפוצות ביותר הן:

1) שיטה מאוחדתברנדברג-רוברטס-סטולניקוב, המבוססת על מבחן הטבעת של גלר;
2) שיטה פוטו-אלקטרו-קולורימטרית לקביעה כמותית של חלבון בשתן על ידי העכירות שנוצרת בתוספת חומצה סולפסליצילית;
3) שיטת ביורה.

זיהוי חלבון בשתן בשיטה מואצת פשוטה מבוצעת בשיטה קולורימטרית באמצעות נייר אינדיקטור, המיוצר על ידי Lachema (סלובקיה), Albuphan, Ames (אנגליה), Albustix, Boehringer (גרמניה), Comburtest ועוד. השיטה מורכבת מ- טבילת רצועת נייר מיוחדת ספוגה בטטרברומופנול כחול ובחיץ ציטראט לתוך השתן, המשנה את צבעו מצהוב לכחול בהתאם לתכולת החלבון בשתן. באופן טנטטיבי, ריכוז החלבון בשתן הבדיקה נקבע באמצעות סולם סטנדרטי. בשביל לקבל תוצאות נכונותיש לכבד התנאים הבאים. pH בשתן צריך להיות בטווח של 3.0-3.5; שתן בסיסי מדי (pH 6.5) ייתן תוצאה חיובית שגויה, ושתן חומצי מדי (pH 3.0) יביא לתוצאה חיובית שגויה.

הנייר לא אמור להיות במגע עם שתן הבדיקה למשך זמן רב יותר מהמצוין בהוראות, אחרת הבדיקה תיתן תגובה חיובית כוזבת. האחרון נצפה גם כאשר יש כמות גדולה של ריר בשתן. הרגישות של סוגים וסדרות שונות של נייר יכולה להיות שונה, ולכן יש להתייחס בזהירות להערכה הכמותית של חלבון בשתן בשיטה זו. קביעת כמותו בשתן היומי באמצעות נייר מחוון היא בלתי אפשרית [Pletneva N.G., 1987]

הגדרה של פרוטאינוריה יומית

ישנן מספר דרכים לקבוע את כמות החלבון המופרשת בשתן ביום. הפשוטה ביותר היא שיטת ברנדברג-רוברטס-סטולניקוב.

מֵתוֹדוֹלוֹגִיָה. 5-10 מ"ל של שתן יומי מעורב ביסודיות מוזגים למבחנה ומוסיפים בזהירות תמיסה של 30% של חומצה חנקתית לאורך דפנותיה. בנוכחות חלבון בשתן בכמות של 0.033% (כלומר 33 מ"ג לליטר שתן), מופיעה טבעת לבנה דקה אך גלויה בבירור לאחר 2-3 דקות. בריכוז נמוך יותר הבדיקה שלילית. עם תכולת חלבון גבוהה יותר בשתן, הכמות שלו נקבעת על ידי דילולים חוזרים של שתן במים מזוקקים עד שהטבעת מפסיקה להיווצר. במבחנה האחרונה שבה הטבעת עדיין נראית, ריכוז החלבון יהיה 0.033%. הכפלת 0.033 בדרגת דילול השתן, קבע את תכולת החלבון בליטר של שתן לא מדולל בגרמים. אז תכולת החלבון בשתן היומי מחושבת על ידי הנוסחה:

K \u003d (x V) / 1000

כאשר K היא כמות החלבון בשתן היומי (g); x הוא כמות החלבון בליטר שתן אחד (g); V הוא כמות השתן המופרשת ביום (מ"ל).

בדרך כלל, מ-27 עד 150 מ"ג (ממוצע 40-80 מ"ג) של חלבון מופרש בשתן במהלך היום.

בדיקה זו מאפשרת לקבוע בשתן חלבונים עדינים בלבד (אלבומין). שיטות כמותיות מדויקות יותר (שיטת Kjeldahl קולורימטרית וכו') הן מורכבות למדי ודורשות ציוד מיוחד.

בפרוטאינוריה כלייתית, לא רק אלבומינים מופרשים בשתן, אלא גם סוגים אחרים של חלבון. פרוטאינוגרמה תקינה (לפי Seitz et al., 1953) מכילה את האחוזים הבאים: אלבומינים - 20%, α 1 -גלובולינים - 12%, α 2 -גלובולינים - 17%, γ-גלובולינים - 43% ו-β-גלובולינים - 8%. היחס בין אלבומינים לגלובולינים משתנה עם מחלות כליה שונות, כלומר. היחס הכמותי בין שברי חלבון נשבר.

השיטות הנפוצות ביותר לפירוק אורפרוטאינים הן הבאות: המלחה עם מלחים ניטרליים, חלוקה אלקטרופורטית, שיטות אימונולוגיות (תגובת אימונודיפוזיה רדיאלית לפי מנצ'יני, ניתוח אימונואלקטרופורטי, אימונואלקטרופורזה של משקעים), כרומטוגרפיה, סינון ג'ל ואולטרה צנטריפוגה.

בקשר להכנסת שיטות לפירוק אורופרוטאין המבוססות על חקר ניידות אלקטרופורטית, שונות במשקל מולקולרי, גודל וצורה של מולקולות אורופרוטאין, התאפשר לבודד את סוגי הפרוטאוריה האופייניים למחלה מסוימת, כדי לחקור את הפינוי של חלבוני פלזמה בודדים. עד כה זוהו יותר מ-40 חלבוני פלזמה בשתן, כולל שתן רגיל 31 חלבוני פלזמה.

פרוטאינוריה סלקטיבית

IN השנים האחרונותהרעיון של סלקטיביות פרוטאינוריה הופיע. ב-1955 גיבשו הארדוויק וסקוויר את המושג של פרוטאינוריה "סלקטיבית" ו"לא סלקטיבית", לאחר שקבעו שסינון חלבוני הפלזמה לתוך השתן מתנהל לפי דפוס מסוים: ככל שהמשקל המולקולרי של החלבון המופרש בשתן גדול יותר, ככל שהפינוי שלו נמוך יותר וריכוזו בשתן נמוך יותר.שתן סופי. פרוטאינוריה, המקבילה לדפוס זה, היא סלקטיבית, בניגוד לא-סלקטיבית, שאופייני לה סטיית התבנית הנגזרת.

גילוי חלבונים בעלי משקל מולקולרי גדול יחסית בשתן מעיד על היעדר סלקטיביות של מסנן הכליות ועל נזקו הבולט. במקרים אלו, מדברים על סלקטיביות נמוכה של פרוטאינוריה. לכן, כיום, קביעת שברי חלבון בשתן באמצעות שיטות אלקטרופורזה בג'לים של עמילן ופולי-אקרילאמיד הפכה לנפוצה. בהתבסס על תוצאות שיטות מחקר אלו, ניתן לשפוט את הסלקטיביות של פרוטאינוריה.

לפי V.S. Makhlina (1975), המוצדקת ביותר היא קביעת הסלקטיביות של פרוטאינוריה על ידי השוואת הפינוי של 6-7 חלבוני פלזמה בדם בודדים (אלבומין, טרנפרין, α 2 - מקרוגלובולין, IgA, IgG, IgM) תוך שימוש מדויק שיטות אימונולוגיות כמותיות ספציפיות של תגובה של אימונודיפוזיה רדיאלית לפי מנצ'יני, ניתוח אימונואלקטרופורטי ואימונואלקטרופורזה של משקעים. מידת הסלקטיביות של פרוטאינוריה נקבעת על ידי מדד הסלקטיביות, שהוא היחס בין חלבוני ההשוואה והייחוס (אלבומין).

מחקר הפינוי של חלבוני פלזמה בודדים מאפשר קבלת מידע אמין על מצב ממברנות הבסיס של הסינון של הגלומרולי של הכליה. הקשר בין אופי החלבונים המופרשים לשתן לבין שינויים בקרומי הבסיס של הגלומרולי הוא כה בולט וקבוע עד שהאורפרוטאינוגרמה יכולה לשפוט בעקיפין שינויים פתופיזיולוגיים בגלומרולי של הכליות. בדרך כלל, גודל הנקבוביות הממוצע של קרום הבסיס הגלומרולרי הוא 2.9-4 A°NM, שיכול להעביר חלבונים במשקל מולקולרי של עד 10 4 (מיוגלובולין, חומצה α 1 - גליקופרוטאין, שרשראות קלות של אימונוגלובולינים, Fc ו-Fab - IgG פרגמנטים, אלבומין וטרנספרין).

עם גלומרולונפריטיס, תסמונת נפרוטית, גדלים גודל הנקבוביות בקרומי הבסיס של הגלומרולי, ולכן קרום הבסיס הופך לחדיר למולקולות חלבון בגודל ובמסה גדולה (סרולופלסמין, הפטוגלובין, IgG, IgA וכו'). עם רמה קיצונית של פגיעה בגלומרולי של הכליות, מופיעות בשתן מולקולות ענק של חלבוני פלזמה בדם (α 2 -macroglobulin, IgM ו-β 2 -lipoprotein).

בקביעת ספקטרום החלבון של שתן, ניתן להסיק שחלקים מסוימים של הנפרון מושפעים בעיקר. עבור glomerulonephritis עם נגע דומיננטי של ממברנות בסיס גלומרולרי, נוכחות של חלבונים במשקל מולקולרי גדול ובינוני בשתן אופיינית. עבור פיילונפריטיס עם נגע דומיננטי של ממברנות הבסיס של האבובות, היעדר מקרומולקולרי ונוכחות של כמויות מוגדלותחלבונים במשקל מולקולרי בינוני ונמוך.

β 2 -מיקרוגלובולין

בנוסף לחלבונים ידועים כמו אלבומין, אימונוגלובולינים, ליפופרוטאינים. פיברינוגן, טרנספרין, שתן מכיל חלבוני מיקרופרוטאין פלזמה, ביניהם β 2-microglobulin, שהתגלה על ידי ברגארד וברן בשנת 1968, הוא בעל עניין קליני. בעל משקל מולקולרי נמוך (משקל מולקולרי יחסי של 1800), הוא עובר בחופשיות דרך גלומרולי הכליה ונספג מחדש בצינוריות הפרוקסימליות. זה מאפשר קביעה כמותית של β 2 -microglobulin בדם ובשתן כדי לקבוע את הסינון הגלומרולרי ואת היכולת של הכליות לספוג חלבונים באבוביות הפרוקסימליות.

הריכוז של חלבון זה בפלסמה ובשתן בדם נקבע על ידי בדיקת רדיואימונית באמצעות סט סטנדרטי"Phade-bas β 2 -mikroiest" (Pharmacia, שוודיה). נסיוב הדם של אנשים בריאים מכיל בממוצע 1.7 מ"ג לליטר (נע בין 0.6 ל-3 מ"ג לליטר), בשתן - ממוצע של 81 מיקרוגרם לליטר (מקסימום 250 מיקרוגרם לליטר) β 2 -מיקרוגלובולין. עודף שלו בשתן מעל 1000 מק"ג/ליטר הוא תופעה פתולוגית. תכולת β 2-microglobulin בדם עולה במחלות המלוות בפגיעה בסינון גלומרולרי, בפרט בגלומרולונפריטיס חריפה וכרונית, מחלת כליות פוליציסטית, נפרוסקלרוזיס, נפרופתיה סוכרתית, אי ספיקת כליות חריפה.

הריכוז של β 2 -microglobulin בשתן עולה עם מחלות המלוות בהפרה של תפקוד הספיגה מחדש של האבוביות, מה שמוביל לעלייה בהפרשתו בשתן פי 10-50, בפרט, עם פיאלונפריטיס, כליות כרוני. כישלון, שיכרון מוגלתי וכו'. זה אופייני שעם דלקת שלפוחית ​​השתן בשונה מפיאלונפריטיס, אין עלייה בריכוז של β 2 -microglobulin בשתן, שיכול לשמש לאבחנה מבדלת של מחלות אלו. עם זאת, כאשר מפרשים את תוצאות המחקר, יש לקחת בחשבון שכל עלייה בטמפרטורה מלווה תמיד בעלייה בהפרשת β 2 -microglobulin בשתן.

ממוצע מולקולות דם ושתן

מולקולות בינוניות (SM), הנקראות אחרת רעלני חלבון, הן חומרים בעלי משקל מולקולרי של 500-5000 דלטון. המבנה הפיזי שלהם אינו ידוע. ההרכב של SM כולל לפחות 30 פפטידים: אוקסיטוצין, וזופרסין, אנגיוטנסין, גלוקגון, הורמון אדרנו-קורטיקוטרופי (ACTH) וכו'. הצטברות יתר של SM נצפית עם ירידה בתפקוד הכליות וכמות גדולה של חלבונים מעוותים ומטבוליטים שלהם בגוף. דָם. יש להם מגוון השפעות ביולוגיות והם נוירוטוקסיים, גורמים לדיכוי חיסוני משני, אנמיה משנית, מעכבים ביוסינתזה של חלבונים ואריתרופואזה, מעכבים את פעילותם של אנזימים רבים ומשבשים את שלבי התהליך הדלקתי.

רמת ה-SM בדם ובשתן נקבעת על ידי בדיקת סקר, וכן על ידי ספקטרופוטומטריה באזור האולטרה סגול באורך גל של 254 ו-280 מ"מ בספקטרופוטומטר DI-8B, וכן ספקטרופוטומטריה דינמית עם עיבוד מחשב באורך הגל. טווח של 220-335 ננומטר באותו ספקטרומטר בקמן. התוכן של SM בדם נלקח כנורמה, שווה ל 0.24 ± 0.02 arb. יחידות, ובשתן - 0.312 ± 0.09 ארב. יחידות
בהיותם תוצרי פסולת רגילים של הגוף, הם בדרך כלל מוסרים ממנו בלילה על ידי סינון גלומרולרי ב-0.5%; 5% מהם נפטרים בדרך אחרת. כל חלקי ה-SM עוברים ספיגה חוזרת של צינורית.

אורפרוטאינים שאינם פלזמה (רקמות).

בנוסף לחלבוני פלזמה בדם, עשויים להיות חלבונים שאינם פלזמה (רקמה) בשתן. לפי Buxbaum and Franklin (1970), חלבונים שאינם פלזמה מהווים כ-2/3 מכלל הביקולואידים בשתן וחלק ניכר מהאורפרוטאינים בפרוטאינוריה פתולוגית. חלבוני רקמות חודרים לשתן ישירות מהכליות או מהאיברים הקשורים אנטומית לדרכי השתן, או חודרים לדם מאיברים ורקמות אחרות, וממנו דרך ממברנות הבסיס של הגלומרולי של הכליה אל השתן. במקרה האחרון, הפרשת חלבוני רקמה לתוך השתן מתרחשת בדומה להפרשה של חלבוני פלזמה במשקלים מולקולריים שונים. ההרכב של אורפרוטאינים שאינם פלזמה מגוון ביותר. ביניהם גליקופרוטאין, הורמונים, אנטיגנים, אנזימים (אנזימים).

חלבוני רקמות בשתן מתגלים בשיטות קונבנציונליות של כימיית חלבון (אולטרה-צנטריפוגה, כרומטוגרפיה ג'ל, אפשרויות שונותאלקטרופורזה), תגובות ספציפיות לאנזימים והורמונים ושיטות אימונולוגיות. אלה האחרונים גם מאפשרים לקבוע את ריכוז האורפרוטאינים שאינם פלזמה בשתן, ובמקרים מסוימים, לקבוע את מבני הרקמה שהפכו למקור הופעתו. השיטה העיקרית לזיהוי חלבון שאינו פלזמה בשתן היא ניתוח אימונודיפוזיה עם אנטי-סרום המתקבל על ידי חיסון של חיות ניסוי עם שתן אנושי ולאחר מכן מדולדל (נספג) על ידי חלבוני פלזמה בדם.

בדיקת אנזימים בדם ובשתן

בתהליך הפתולוגי, נצפות הפרעות עמוקות בפעילות החיונית של תאים, המלוות בשחרור של אנזימים תוך תאיים למדיה הנוזלית של הגוף. אנזימודיאגנוסטיקה מבוססת על קביעה של מספר אנזימים המשתחררים מתאי האיברים הפגועים ואינם אופייניים לסרום הדם.
מחקרים על הנפרון האנושי והחי הראו שבחלקיו הבודדים קיימת התמיינות אנזימטית גבוהה, הקשורה באופן הדוק לתפקודים שכל מחלקה מבצעת. הגלומרולי של הכליה מכילים כמויות קטנות יחסית של אנזימים שונים.

התאים של צינוריות הכליה, במיוחד אלה הפרוקסימליות, מכילים את הכמות המקסימלית של אנזימים. הפעילות הגבוהה שלהם נצפית בלולאה של Henle, צינוריות ישירה וצינורות איסוף. שינויים בפעילותם של אנזימים בודדים במחלות כליה שונות תלויים באופי, בחומרה ובלוקליזציה של התהליך. הם נצפים לפני הופעת שינויים מורפולוגיים בכליות. מאחר שתכולת האנזימים השונים ממוקמת בבירור בנפרון, קביעת אנזים כזה או אחר בשתן יכולה לתרום לאבחון מקומי של התהליך הפתולוגי בכליות (גלומרולי, אבובות, קליפת המוח או מדוללה), האבחנה המבדלת של מחלות כליות וקביעת הדינמיקה (החלשה והחמרה) של התהליך בפרנכימה הכלייתית.

לאבחון דיפרנציאלי של מחלות של מערכת גניטורינארית, נעשה שימוש בקביעת הפעילות בדם ובשתן של האנזימים הבאים: לקטט דהידרוגנאז (LDH), לאוצין aminopeptidase (LAP), חומצה פוספטאז (AP), פוספטאז אלקליין (AP) , β-glucuronidase, glutamine-oxaloacetic transaminase (GST) , aldolase, transamidinase וכו'. הפעילות של אנזימים בדם ובשתן נקבעת בשיטות ביוכימיות, ספקטרופוטומטריות, כרומטוגרפיות, פלואורימטריות וכימי-אורניזנטיות.

אנזימוריה במחלת כליות בולטת וקבועה יותר מאנזימיה. זה בולט במיוחד בשלב החריף של המחלה (פיאלונפריטיס חריפה, טראומה, ריקבון גידול, אוטם כליות וכו'). במחלות אלו, נמצאה פעילות גבוהה של טרנסמידינאז, LDH, פוספטאז אלקליין ו-CP, hyaluronidase, LAP, וכן אנזימים לא ספציפיים כמו GST, catalase [Polyantseva LR, 1972].

לוקליזציה סלקטיבית של אנזימים בנפרון עם זיהוי של LAP ו-ALP בשתן מאפשרת לנו לדבר בביטחון על חריפות ו מחלות כרוניותכליות (אי ספיקת כליות חריפה, נמק צינורי כליות, גלומרולונפריטיס כרונית) [Shemetov VD, 1968]. לפי A.A. Karelin ו-L.R. Polyantseva (1965), טרנסמידינאז נמצא רק בשני איברים - הכליה והלבלב. זהו אנזים מיטוכונדריאלי של הכליות ונעדר בדרך כלל בדם ובשתן. עם מחלות שונות של הכליות, טרנסמידינאז מופיע בדם ובשתן, ועם פגיעה בלבלב - רק בדם.

המבחן הדיפרנציאלי באבחון גלומרולונפריטיס ו-pyelonephritis Krotkiewski (1963) מתייחס לפעילות של פוספטאז אלקליין בשתן, שעלייתו אופיינית יותר לפיאלונפריטיס ולגלומרולוסקלרוזיס סוכרתית מאשר לדלקת כליות חריפה וכרונית. עלייה בדינמיקה של עמילאזמיה עם ירידה בו זמנית בעמילאזוריה עשויה להעיד על נפרוסקלרוזיס וקמטוטים של הכליה, LAP הוא החשוב ביותר ב שינויים פתולוגייםבגלומרולי ובצינוריות המפותלים של הכליה, שכן תכולתו בחלקים אלו של הנפרון גבוהה יותר [Shepotinovsky V.P. et al., 1980]. לאבחון של לופוס נפריטיס, מומלצת קביעת β-glucuronidase ו-CF [Privalenko M.N. et al., 1974].

בעת הערכת תפקידה של אנזמוריה באבחון מחלת כליות, יש לקחת בחשבון את ההוראות הבאות. אנזימים, שהם מטבעם חלבונים, בעלי משקל מולקולרי קטן יכולים לעבור דרך גלומרולים שלמים, ולקבוע את האנזים הפיזיולוגי כביכול. בין האנזימים הללו, α-עמילאז (משקל מולקולרי יחסי 45,000) ואורופפסין (משקל מולקולרי יחסי 38,000) מזוהים כל הזמן בשתן.

לצד אנזימים נמוכים מולקולריים בשתן של אנשים בריאים, ניתן למצוא גם אנזימים אחרים בריכוזים קטנים: LDH, אספרטאט ואלנין אמינוטרנספראזות, פוספטאז אלקליין ו-CP, מלטאז, אלדולאז, ליפאז, פרוטאזות ופפטאזות שונות, סולפאז, קטלאז, ריבונוקלאז, פרוקסידאז.

אנזימים מולקולריים גבוהים עם משקל מולקולרי יחסי של יותר מ-70,000-100,000, לפי Richterich (1958) והס (1962), יכולים להיכנס לשתן רק אם נפגעת החדירות של המסנן הגלומרולרי. התוכן הנורמלי של אנזימים בשתן אינו מאפשר לשלול את התהליך הפתולוגי בכליה עם חסימת השופכה. עם אפימוריה, שחרור של אנזימים אפשרי לא רק מהכליות עצמן, אלא גם מאיברים פרנכימליים אחרים, תאים של הממברנות הריריות של דרכי השתן, בלוטת הערמונית, כמו גם אלמנטים שנוצרו של שתן עם המטוריה או לויקוציטוריה.

רוב האנזימים אינם ספציפיים לכליה, ולכן קשה לקבוע מהיכן מגיעים האנזימים המצויים בשתן של אנשים בריאים וחולים. עם זאת, מידת האנזימוריה, גם עבור אנזימים לא ספציפיים בנזק לכליות, גבוהה מהנורמה או מזו הנצפית במחלות של איברים אחרים. מידע בעל ערך רב יותר יכול להינתן על ידי מחקר מקיף של הדינמיקה של מספר אנזימים, במיוחד אלה הספציפיים לאיברים, כגון טרנסמינאז.

בפתרון סוגיית המקור הכלייתי של האנזים בשתן, חקר האיזואנזימים מסייע לזהות שברים אופייניים לאיבר הנחקר. איזואנזימים הם אנזימים שהם איזוגניים בפעולה (מזרזים את אותה תגובה), אך הטרוגניים במבנה הכימי ובתכונות אחרות. לכל רקמה יש ספקטרום איזואנזים משלה. שיטות בעלות ערך להפרדה של איזואנזימים הן אלקטרופורזה בג'לים של עמילן ופוליאקרילאמיד, כמו גם כרומטוגרפיה של חילופי יונים.

חלבון בנס ג'ונס

עם מיאלומה נפוצה ומקרוגלובלינמיה של Waldenström, חלבון Bence-Jones נמצא בשתן. השיטה לזיהוי חלבון זה בשתן מבוססת על תגובת התרמו-משקעים. שיטות ששימשו בעבר שמעריכות את פירוק חלבון זה בטמפרטורה של 100 מעלות צלזיוס ומשקעים מחדש עם קירור לאחר מכן אינן אמינות, מכיוון שלא לכל גופי החלבון של Bence-Jones יש את התכונות המתאימות.

זיהוי אמין יותר של הפרפרוטאין הזה על ידי המשקעים שלו בטמפרטורה של 40-60 מעלות צלזיוס. עם זאת, אפילו בתנאים אלה, משקעים עשויים שלא להתרחש בחומצי מדי (pH< 3,0—3,5) или слишком щелочной (рН >6,5) שתן, עם OPM נמוך וריכוז חלבון Bence-Jones נמוך. התנאים הנוחים ביותר למשקעים שלו מסופקים בשיטה המוצעת על ידי Patnem: 4 מ"ל של שתן מסונן מעורבב עם 1 מ"ל של 2 M אצטט חיץ pH 4.9 ומחומם במשך 15 דקות באמבט מים בטמפרטורה של 56 מעלות צלזיוס. בנוכחות חלבון בנס-ג'ונס, משקע בולט מופיע במהלך 2 הדקות הראשונות.

בריכוז חלבון בנס-ג'ונס של פחות מ-3 גרם/ליטר, הבדיקה עשויה להיות שלילית, אך בפועל הדבר נדיר ביותר, שכן לרוב ריכוזו בשתן משמעותי יותר. לא ניתן לסמוך במלואו על דגימות רתיחה. בוודאות מלאה, ניתן לזהות אותו בשתן בשיטה אימונו-אלקטרופורטית תוך שימוש בסמים ספציפיים כנגד שרשראות כבדות וקלות של אימונוגלובולינים.

הרכב מקום העבודה לקביעת חלבון בשתן כולל את המרכיבים הבאים:

1. מבחנות כימיות, אגלוטינציה.
2. סט של פיפטות מדורגות.
3. פיפטות עם קצה משוך צר.
4. מנורות אלכוהול או מבער גז.
5. נייר שחור.
6. חומצה אצטית קרחונית.
7. חומצה סולפוסיצילית.
8. חומצה חנקתית מרוכזת.
9. מים מזוקקים.

שיטות לקביעת חלבון בשתן

כל השיטות המשמשות לקביעה איכותית של חלבון בשתן מבוססות על קרישת חלבון. קרישת חלבון באה לידי ביטוי בעכירות המתבטאת בדרגות שונות (מאטימות ועד עכירות גבוהה) או התקלפות.

קביעה איכותית של חלבון בשתן יכולה להתבצע באחת מהדרכים הבאות:

1. רותחים עם תמיסת חומצה אצטית 10%;
2. תגובה עם תמיסה של 20% של חומצה sulfosalicylic;
3. תגובה עם תמיסת חומצה חנקתית 50% (בדיקת גלר);
4. תגובה עם תמיסה של 1% של חומצה חנקתית בתמיסה רוויה של מלח רגיל (מבחן גלר שונה לפי Larionova).

לפני הקביעה האיכותית של חלבון בשתן, מתבצעת עבודת ההכנה הבאה:
1. שתן עכור מסונן דרך מסנן נייר. אם לא ניתן להשיג סינון שקוף, מבצעים סינון חוזר דרך אותו מסנן או מערבבים שתן עם כמות קטנהאדמה דיאטומית או טלק, ולאחר מכן הוא מסונן.
2. אם לשתן יש תגובה בסיסית, הוא מחומצן עם תמיסה 10% של חומצה אצטית לתגובה מעט חומצית בשליטה של ​​לקמוס או נייר אינדיקטור אוניברסלי.
3. עם תכולת מלח נמוכה (שתן צהוב בהיר או צהוב בהיר עם משקל סגולי נמוך) לכל אחד
כמה טיפות של תמיסת נתרן כלורי רוויה מתווספות לדגימה, שכן המחסור במלחים גורם לקרישיות החלבון.
4. מידת העכירות נצפית באמצעות רקע שחור. הרקע הוא קרטון שחור או נייר שחור המשמש בצילום. התחשבות בתגובה על רקע שחור מאפשרת לך לזהות את המידה הקלה ביותר של עכירות.

מבחנות ממוספרות מונחות במדף נפרד. הם מייצרים אחת מהתגובות הבאות.

1. בדיקת רתיחה עם תמיסת חומצה אצטית 10%. בדיקה זו דורשת תמיסה של 10% של חומצה אצטית, המוכנה באופן הבא: 10 מ"ל חומצה קרחונית מונחים בגליל ומוסיפים מים מזוקקים עד לסימון 100 מ"ל.

טכניקת קביעת חלבון. 10-12 מ"ל של שתן מסונן עם תגובה חומצית מעט מונח במבחנה כימית. לאחר מכן חלק עליוןמבחנות עם שתן מחוממות בזהירות לרתיחה ומוסיפים לה 8-10 טיפות של תמיסה של 10% חומצה אצטית. מבחנה עם שתן נראית על רקע שחור באור מועבר. בנוכחות חלבון בשתן מופיעה עכירות בדרגות שונות (מאטימות ועד עכירות רבה) או נושרים פתיתים. הבקרה היא החלק התחתון של המבחנה, לא נתון לחימום. בדיקה זו מזהה את כמות החלבון, החל מ-0.015% o (% o - פרומיל).

2. תגובה עם תמיסת חומצה סולפוסליצילית 20%. מכינים תמיסת 20% של חומצה סולפוסליצילית באופן הבא: 20 גרם חומצה סולפוסליצילית מומסים ב-70-80 מ"ל מים מזוקקים, מועברים לגליל של 100 מ"ל ומוסיפים מים מזוקקים עד לסימון. המגיב המוכן מאוחסן במיכל זכוכית כהה.

טכניקת קביעת חלבון. בשתי צינורות באותו קוטר שמים 2-3 מ"ל שתן מסונן של תגובה חומצית חלשה, 3-4 טיפות של תמיסה 20% של חומצה סולפוסיצילית מתווספות לאחד הצינורות, הצינור השני משמש כבקרה. . אם קיים חלבון בצינור המגיב, יופיעו עכירות או פתיתי חלבון קרושה. בצינור הבקרה, הנוזל נשאר צלול. חומצה סולפוסליצילית, יחד עם חלבון בסרום, מזרזת אלבומוזות (פפטידים), שהם תוצר של פירוק חלבון. על מנת לברר את הסיבה לשתן עכור, מחממים את המבחנה עם השתן. העכירות הנגרמת על ידי חלבוני הסרום מוגברת, בעוד שהעכירות עקב נוכחות אלבומוז נעלמת. לבדיקה זו יש אותה רגישות כמו הקודמת.

3. תגובה עם תמיסת חומצה חנקתית 50% (בדיקת גלר). תמיסת 50% של חומצה חנקתית מוכנה באופן הבא: 50 מ"ל מים מזוקקים (דילול 1:1) מוסיפים ל-50 מ"ל חומצה חנקתית עם משקל סגולי של 1.2-1.4.

טכניקת קביעת חלבון. יוצקים 1 מ"ל של חומצה חנקתית 50% לתוך מבחנה קטנה צרה (אגלוטינציה נוזלת). 1 מ"ל של שתן בדיקה מסונן נאסף לפיפטה עם קצה משוך צר, מונח בשכבות על המגיב, והצינור מועבר למצב אנכי. בנוכחות חלבון מופיעה טבעת לבנה בממשק הנוזלים. זמן הופעת הטבעת, תכונותיה תלויות בכמות החלבון: אם החלבון נמוך, אז הטבעת אינה מופיעה מיד, לכן, המראה שלה מנוטר במשך 2.5-3 דקות. כמות החלבון המינימלית שנקבעה בשיטה זו היא 0.033°/oo. עם תכולת חלבון נמוכה יותר בשתן, הטבעת אינה נוצרת. התחשבות בתוצאות התגובה המופקת על רקע שחור באור משודר.

4. התגובה עם תמיסה של 1% של חומצה חנקתית בתמיסה רוויה של מלח רגיל היא בדיקת גלר שונה (לפי לאריונובה).לצורך הבדיקה משתמשים בתמיסה של חומצה חנקתית בשיעור 1%, שהוכנה בתמיסה רוויה של מלח רגיל (ריאגנט של לריונובה). 35 גרם מלח רגיל מומסים ב-100 מ"ל מים מזוקקים, התמיסה עוברת סינון, 99 מ"ל מתמיסת נתרן כלורי רוויה המוכנה מתווספת ל-1 מ"ל חומצה חנקתית מרוכזת עם משקל סגולי של 1.2-1.4.

טכניקת קביעת חלבון אותו דבר כמו בתגובה עם תמיסה של 50% של חומצה חנקתית (מבחן גלר), אבל במקום 1 מ"ל של 50% תמיסה של חומצה חנקתית, 1 מ"ל מגיב של לריונובה נשפך למבחנה ו-1 מ"ל שתן. שכבות עליו. הופעת טבעת לבנה בגבול הנוזלים מעידה על נוכחות חלבון בשתן הבדיקה. מבחן לריונובה רגיש כמו מבחן הלר.

5. בדיקה קולורימטרית (יבשה) לקביעה איכותית של חלבון. הבדיקה הקולורימטרית (יבשה) לקביעה איכותית של חלבון בשתן מבוססת על ההשפעה שיש לחלבון על צבע המחוון בתמיסת חיץ.

טכניקת קביעת חלבון. פיסת נייר מחוון שנועדה לקבוע את החלבון טובלת בשתן לזמן קצר. המדגם נחשב חיובי אם הנייר הופך לכחול-ירוק.

כימות של חלבון בשתן

הקביעה הכמותית של חלבון בשתן מבוססת על העובדה שכאשר שתן המכיל חלבון מונח על תמיסת 50% של חומצה חנקתית או ריאגנט של לריונובה, נוצרת טבעת לבנה בגבול שני נוזלים, ואם מופיעה טבעת לבנה שקופה. ב-3 דקות, אז תכולת החלבון היא 0.033% בערך או 33 מ"ג ב-1000 מ"ל שתן. הופעת הטבעת לפני 3 דקות מעידה על תכולת חלבון גבוהה יותר בשתן.
בעת כימת חלבון בשתן, יש להקפיד על הכללים הבאים:

1. קביעה כמותית של חלבון מתבצעת רק באותם מנות שתן שבהן הוא זוהה באופן איכותי.
2. הקביעה נעשית עם שתן מסונן בקפידה.
3. בצעו במדויק את הטכניקה של שכבות שתן הבדיקה על תמיסה של 50% של חומצה חנקתית או ריאגנט של לריונובה ביחס בין המגיב לשתן (1:1).
4. זמן הופעת הטבעת נקבע על ידי שעון עצר: בחישוב הסופי של כמות החלבון נלקח בחשבון זמן שכבות השתן על חומצה חנקתית, שהוא 15 שניות.
5. שתן מדולל על סמך תכונות הטבעת. במקרה זה, כל דילול שתן עוקב מוכן מהקודם.
6. טבעות מזוהות על רקע שחור.

הנפוצות ביותר הן שתי שיטות לקביעה כמותית של חלבון בשתן: שיטת רוברטס-סטולניקוב-ברנדברג ושיטת ס.ל. ארליך וא.י.אלטהאוזן.

1. שיטת רוברטס-סטולניקוב-ברנדברג.לפי שיטה זו, כמות החלבון בשתן נקבעת על ידי דילולו עד להופעת השכבה הבאה של שתן על תמיסה של 50% של חומצה חנקתית או ריאגנט הטבעת של לריונוב מופיעה בדיוק ב-3 דקות. כמות החלבון מחושבת על ידי הכפלה של 0.033% בדרגת דילול השתן. התוצאה המתקבלת מבטאת את כמות החלבון במיליגרם לכל 1000 מ"ל שתן, כלומר ב-ppm (% o).
2. שיטת ש"ל ארליך וא"י אלטהוזן.מספר צינורות אגלוטינציה מונחים במדף, שאליו יוצקים תחילה 1 מ"ל של תמיסה של 50% של חומצה חנקתית או מגיב של לריונובה. שתן הבדיקה נלקח עם פיפטה נקייה ויבשה נפרדת עם קצה צר ונמשך ושכבה על המגיב, ולאחר מכן מופעל שעון העצר. זמן הופעת הטבעת מנוטר על ידי הנחת המבחנה על רקע שחור. כשהצלצול מופיע, שעון העצר כבוי.

בעת שכבות שתן, בהתאם לכמות החלבון, עשויה להופיע טבעת קומפקטית, רחבה או דמוית חוט. טבעת קומפקטית ורחבה מופיעה מיד לאחר שכבת שתן על המגיב. הטבעת דמוית החוט עשויה להופיע מיד, לפני תום דקה אחת, או במרווח שבין דקה ל-4 דקות.

כאשר מופיעה טבעת פיליפורמית תוך דקה עד 4 דקות, אין צורך לדלל את השתן!
כדי לחשב את כמות החלבון במקרה זה, די להשתמש בתוכנית הטבלה המוצעת על ידי המחברים (טבלה 1).

דוגמה 1כאשר משכבים שתן על המגיב, נוצרה טבעת פיליפורמית לאחר 2 דקות. אם הטבעת הייתה נוצרת ב-3 דקות, אזי כמות החלבון הייתה 0.033%.

במקרה זה, הטבעת נוצרה קודם לכן. התיקון המתאים, לפי טבלת התוכנית, לזמן של 2 דקות הוא 1 + 1/8. המשמעות היא שהחלבון בחלק זה של השתן יהיה פי 1 + 1/8 מ-0.033 ° / oo, כלומר 0.033% o X (1 + 1/8) \u003d 0.037 ° / oo.

כאשר מופיעה טבעת פיליפורמית עד דקה אחת, כלומר לאחר 40-60 שניות, דילול שתן אחד מתבצע פי 1.5 (2 חלקי שתן + חלק מים), ולאחר מכן השתן המדולל שוב מונח על המגיב. והמראה של הטבעת מתועד. בעת חישוב התוצאות, נלקח בחשבון שהשתן היה מדולל 1.5 פעמים.

דוגמה 2לאחר שכבות שתן מדולל 1.5 פעמים, הופיעה טבעת פיליפורמית ב-2 דקות. אם הטבעת הופיעה ב-3 דקות, החלבון יהיה 0.033%. התיקון המקביל לפי תכנית הטבלה, לזמן של 2 דקות הוא 1 + 1/8. חלבון בשתן מכיל 0.033% oX1.5X (1 + 1/8) \u003d 0.056% o.

אם הטבעת הפיליפורמית מופיעה מיד, השתן מדולל 2 פעמים (1 חלק שתן + 1 חלק מים). השתן המדולל שוב מונח על המגיב והמראה של הטבעת מצוין לאחר דקה.

דוגמה 3כאשר משכבים שתן מדולל 2 פעמים על המגיב, הופיעה טבעת פיליפורמית לאחר דקה אחת ו-15 שניות. אז כמות החלבון בשתן הנחקר, באנלוגיה לחישובים קודמים, תהיה שווה ל
0.033% oX2X (1 + 3/8) \u003d 0.091%.
אם מופיעה טבעת רחבה, השתן מדולל 4 פעמים (1 חלק שתן + 3 חלקים מים).
עם השכבות הבאות של שתן מדולל, טבעת פיליפורמית יכולה להיווצר הן לפני ואחרי דקה אחת. במקרים כאלה, החישוב של כמות החלבון מתבצע באנלוגיה לדוגמאות הקודמות, כלומר, 0.033% o מוכפל במידת הדילול ובתיקון המתאים.

דוגמה 1הטבעת לאחר דילול שתן 4 פעמים הופיעה מיד. שתן מדולל 2 פעמים. לאחר שכבות שתן מדולל 8 פעמים (4X2), נוצרה טבעת פיליפורמית לאחר 1.5 דקות. במקרה זה, כמות החלבון היא 0.033% oX8X1.25 \u003d 0.33% o וכו'.
כאשר מופיעה טבעת קומפקטית, השתן מדולל 8 פעמים (1 חלק שתן + 7 חלקים מים). לאחר השכבה הבאה של שתן מדולל על המגיב, עשויה להיווצר טבעת קומפקטית או רחבה או פיליפורמית.

דוגמה 2כאשר השתן היה שכבה על חומצה חנקתית, נוצרה מיד טבעת קומפקטית. שתן מדולל 8 פעמים (1 חלק שתן + 7 חלקי מים) ושוב הוא מרובד. זה שוב הביא לטבעת קומפקטית. לאחר מכן מדללים את השתן עוד 8 פעמים (בשביל זה לוקחים חלק אחד מהשתן המדולל לתוך גליל או למבחנה ומוסיפים לו 7 חלקים של מים). לאחר שכבות נוספות של שתן מדולל, נוצרה מיד טבעת פיליפורמית. שתן מדולל 2 פעמים (1 חלק שתן + 1 חלק מים). לאחר השכבה הבאה של שתן מדולל, נוצרה טבעת פיליפורמית לאחר 2 דקות. החישוב של כמות החלבון בחלק נתון של שתן מתבצע באופן הבא: 0.033,% oX8X8X2X (1 + 1/8) = 4.8% o.

בנוסף לטבלת התכנית ישנה טבלה עם מספרי חלבונים מחושבים (טבלה 2). אם השתן אינו מדולל, אזי כמות החלבון נמצאת בעמודה "שתן שלם לא מדולל". בעת דילול שתן במספר שלם של פעמים (8,4,2), משתמשים בטבלה 1. 1. בעת דילול שתן פי 1.5, השתמש בטבלה. 2.

טכניקה לשימוש בטבלה לקביעת תכולת החלבון בשתן

בעמודות המתאימות של הטבלה מצוין זמן הופעת הטבעת ומידת דילול השתן.
המספר הממוקם בנקודת החיתוך של האופקי ו קווים אנכיים, שנלקח משני אינדיקטורים אלה, מציין את כמות החלבון בשתן הבדיקה (% o).

ייתכן שעם בדיקה איכותית חיובית לחלבון, הטבעת אינה נוצרת כאשר מניחים אותה על תמיסה של 50% חומצה חנקתית. המשמעות היא שכמות החלבון בשתן היא פחות מ-0.033%. במקרים כאלה, כמות החלבון בצורת הניתוח מכונה "עקבות".

אם החלבון מכומת, תכולת החלבון ב-ppromill מצוינת בצורת בדיקת שתן, למשל, "חלבון - 0.66% o".

בנוסף לקביעה כמותית של חלבון בחלק נפרד של שתן, מחושבת הכמות היומית שלו בגרמים. לשם כך אוספים שתן יומיומי, מודדים את כמותו וקובעים את תכולת החלבון בפרומיל. לאחר מכן נעשה חישוב. לדוגמה, כמות השתן היומית היא 1800 מ"ל, חלבון - 7 ° / oo. המשמעות היא שהחלבון בכמות השתן היומית מכיל: 1.8X7 \u003d 12.6 גרם.